[发明专利]染色体制备方法及所需培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及人类医学遗传学、生殖医学领域中一种有效的染色体分子试剂材料，具体涉及染色体疾病诊断的一种染色体制备方法及所需培养基及其制备方法。

背景技术

染色体是遗传物质即基因的载体，人类每个细胞中有46条染色体，其中44条常染色体，2条性染色体。无论是常染色体，还是性染色体，它们都携带着上千个基因，所以，染色体数目或微小的结构异常，都将引起许多基因的增加或缺失，而产生多种畸形或异常的综合征。染色体数目或结构异常所引起的疾病叫做染色体病，染色体病常以综合征的形式存在。

染色体病是一种常见的遗传病，无论是染色体数目异常还是染色体结构异常都可导致先天畸形、智力低下、流产、不孕、生长发育障碍等，严重地危害着人们的身心健康。

染色体检查主要用于病情诊断。临床凡是发现有明显的生长发育异常、多发畸形、皮肤纹理异常、生殖系统发育异常等，需要明确是不是染色体存在缺陷或者异常；怀疑有唐氏综合征的个体及其双亲，由遗传引起的智力低下者；原因不明的反复的自然流产、胎儿发育畸形、胚胎或者胎儿停止发育、曾经出生的新生儿死亡，这样的夫妇需要检查染色体；从来没有月经来潮，长期不能正常怀孕、幼稚子宫、先天性睾丸发异常、无精子症或者精子发育等严重异常、生殖器官发育异常等，需要检查染色体确诊。

染色体检查比较简单，目前我国一般的县以上医院都可以检查。检查的方法是采用细胞培养显带技术。当怀疑双方都有可能存在问题时夫妇两人都要检查。检查结果男性应该为46XY，而女性则是46XX，除此之外的结果都是异常的、病态的。

目前临床常用染色体检查方法有：荧光原位杂交技术、聚合酶链反应技术、引物原位标记技术、核型分析技术。鉴于核型分析技术成本低、准确性高等特点，为大、中型医院广为所用。

但是，国内各医院和实验室进行染色体检查所用的培养基没有统一标准，质量极不稳定，由其培养的染色体分裂相数目少且染色体不够细长，不便于临床染色体检查分析以及科研，常导致无法进行染色体分析，影响疾病的诊断。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于克服上述不足，提供一种质量稳定，由其培养的染色体分裂相数目众多且染色体细长，便于临床染色体检查分析以及科研使用的用于染色体制备的培养基及其制备方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种用于染色体制备的培养基的制备方法，包括以下步骤：

步骤一，制备初始溶液，所述初始溶液配方如下：

RPMI1640：10-11g/L、肝素钠：6400-7000IU、HEPES：1.19-4.05g/L、L-谷氨酰胺：0.5-0.6g/L、NaHCO3：1-2g/L、青霉素G钾：0.05-0.1g/L、硫酸链霉素：0.06-0.1g/L、牛血清：100-200ml/L、注射用水加至1L，搅拌均匀至澄清溶液；

步骤二，过滤除菌，用滤膜将上述初始溶液进行过滤除菌；

步骤三，配制植物血球凝集素PHA溶液，用注射用水配制2％植物血球凝集素PHA溶液，备用；

步骤四，培养基配制，在过滤后的初始溶液中加入所述植物血球凝集素PHA溶液：50-200mg/L，搅拌均匀，制得培养基。

优选的，增加以下步骤：

步骤五：分装

将步骤四所述的溶液分装到西林瓶中，加盖密封。

步骤六：贴签

将步骤五所述的产品贴签，即形成染色体培养基。

一种用于染色体制备的培养基，所述培养基的配方为：RPMI1640：10-11g/L、肝素钠：6400-7000IU、HEPES：1.19-4.05g/L、L-谷氨酰胺：0.5-0.6g/L、NaHCO3：1-2g/L、青霉素G钾：0.05-0.1g/L、硫酸链霉素：0.06-0.1g/L、牛血清：100-200ml/L、植物血球凝集素PHA：50-200mg/L、注射用水加至1L。

优选的，所述培养基的配方为：RPMI1640：10.2-10.6g/L、肝素钠：6400-6500IU、HEPES：2-4g/L、L-谷氨酰胺：0.5-0.6g/L、NaHCO3：1-2g/L、青霉素G钾：0.05-0.1g/L、硫酸链霉素：0.07-0.09g/L、牛血清：150-200ml/L、植物血球凝集素PHA：50-200mg/L、注射用水加至1L。