[发明专利]非人工通气制备心肌肥厚的动物模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物模型的建立方法，特别涉及一种非人工通气制备心肌肥厚的动物模型的方法。

背景技术

心肌肥厚多见于压力负荷长期增加的疾病，如高血压、主动脉瓣狭窄等，它是心脏的一种代偿反应，主要表现为心肌细胞肥大、间质细胞增生、间质胶原沉积、心脏重量增加等。该代偿反应在初期往往是有益的，可以维持正常的室壁张力和氧耗量，但是长期的左室肥厚会显著增加心衰和猝死的发生率。目前，心肌肥厚的分子机制尚不清楚。

建立动物模型对于研究心肌肥厚的机制及治疗有着非常重要的作用，目前，关于压力超负荷的心肌肥厚动物模型，国内多采用自发高血压或腹主动脉缩窄的方法制作。其中，自发性高血压大鼠需要长达24个月的时间才能产生心肌肥厚，而且迄今为止，人们尚未明确自发性高血压大鼠心肌肥厚发生的原因是由于后负荷增加，还是由于心肌细胞基因异常所致，或者是上述两种原因共同作用的结果；腹主动脉缩窄动物模型由于肾灌注的减少，使肾素分泌增加，从而激活了肾素-血管紧张素系统，故其致心肌肥厚的因素较复杂，不适合研究单纯压力超负荷对心肌的影响。而且腹主动脉缩窄后，在实验动物出现心衰前，缩窄近端血压会明显升高，故脑血管血压随之升高，从而使血管紧张素原、酪氨酸羟化酶表达改变。新近出现的主动脉弓部缩窄的模型，也同样存在脑血管血压明显升高的问题。

理想的压力超负荷性左室肥厚模型对于心肌肥厚和心肌纤维化的研究是非常重要的。通常认为通过近心端升主动脉缩窄可以建立更为理想的压力超负荷性左室肥厚模型，最近国外也有相关模型的报道，但是这些研究多需要对实验动物行气管插管，呼吸机辅助呼吸(这种方法称为人工通气)，从而增加了实验条件和操作环节，更重要的是，可能造成严重的气管损伤及机械通气的并发症。

发明内容

本发明的目的是提供一种非人工通气升主动脉缩窄制备心肌肥厚的动物模型的方法，采用本发明方法建立的动物模型，不使用呼吸机，避免了气管损伤及机械通气的并发症，减化实验设备，还可降低成本，对于研究心肌肥厚的机制及治疗有着非常重要的作用。

心肌肥厚的动物模型的制备方法，有以下步骤：

1)取健康的兔子，麻醉，不使用呼吸机，保持兔自然呼吸状态；

2)用型号为3/0的Prolene线结扎升主动脉的根部，使升主动脉直径减少45-55％；

3)4-8周，得到明显心肌肥厚的升主动脉缩窄的模型动物。

步骤2)所述的升主动脉缩窄时用直径为兔子升主动脉直径45-55％的不锈钢丝作升主动脉缩窄的参照。

步骤2)所述的不锈钢丝直径为2.5mm。

本发明制备的心肌肥厚的动物模型，有以下优点：①开胸时不使用呼吸机，即采用非人工通气的方法，可以大大简化实验条件，降低实验成本，利于普及推广；②实验所需时间较短，用4-8周的时间即可使兔快速形成心肌肥厚；③缩窄部位选择在升主动脉近端，靠近主动脉瓣，其引起压力超负荷的因素相对单纯，无药物因素的影响，且不会发生脑血管的高血压，比较接近主动脉瓣狭窄的病理生理改变，可以更好地模拟主动脉瓣狭窄的疾病模型；④缩窄时所用的铁丝预先制好，内径统一，故缩窄程度相对一致；⑤制模的成功率高，术后用超声多普勒检测，于升主动脉缩窄处均探测到高速血流，成功率100％；⑥与大型实验动物比较，较为经济，易于操作。

本发明成功建立了心肌肥厚的动物模型，其制备方法简单，对实验条件要求低，制模时间短，制模效果好，是研究压力负荷过度时心肌肥厚的发生，发展和心衰从代偿走向失代偿过程中的形态及代谢变化较为理想的动物模型，具有非常广泛的应用前景和较好的经济实用价值。

附图说明

图1为超声检查升主动脉根部的血流频谱，其中，图1A为AB组超声检查升主动脉根部的血流频谱，图1B为Sham超声检查升主动脉根部的血流频谱；

图2为动物模型升主动脉缩窄后8周，左室心肌组织学检查图(光镜)，其中，图2A为AB组兔心肌形态学观察图(HE×200)，图2B为Sham兔心肌形态学观察图(HE×200)；

图3为升主动脉缩窄后8周，左室心肌超微结构图片(电镜)，其中，图3A为AB组心肌的透射电镜图(×12500)，图3B为Sham心肌的透射电镜图(×12500)。

具体实施方法

实施例1兔主动脉瓣上升主动脉缩窄模型的建立

健康新西兰大白兔，雌雄不拘，体重1.94±0.11kg，由第三军医大学附属新桥医院实验动物中心提供。随机分为2组，升主动脉缩窄组(AB组)和假手术组(sham组)。