[发明专利]酶法提取植物黄酮化合物的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是一种酶法提取植物黄酮化合物的方法。

背景技术

植物是人类可以利用的最丰富自然资源，植物中所含有的黄酮类生物活性物质是食品、化工和医药工业原料的主要来源。但是，在植物体内这些黄酮类物质以不同的糖苷形式，分布于植物体内不同的部位，如银杏、柿子、核桃、山楂、香椿等的果实、叶片、根茎等。这些功效物质一般在植物果实中苷元型黄酮类含量更多一些，但是在植物茎叶中以低活性的黄酮糖苷类物质所占的比例更高，但是含量却比果实高。因此，富集植物茎叶中的黄酮类生物活性物质，利用化学或生物技术加以修饰改性，提高其生物活性和生物可利用率，具有重要的理论与实际意义。

黄酮类化合物广泛存在于植物的各个部位，尤其是花、叶部位，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中，如苦荞、山楂、桑叶、银杏叶、竹叶、可可、葛根等。有文献估计约有20％的中草药中含有黄酮类化合物，可见其资源之丰富。自1814年发现的第一个黄酮类化合物——白杨素以来，到1980年以分离出黄酮类化合物约2700种。

黄酮类物质是色原酮或色原烷的衍生物，以C6-C3-C6结构为基本母核的天然产物，即两个苯环通过3个碳原子结合而成。其中C3部分可以是脂链，或与C6部分形成六元或五元氧杂环。黄酮类物质主要由花色素、黄酮醇、黄酮、儿茶酚和黄烷酮组成，其中以黄酮醇类最为常见，其次是黄酮类，其余则较少见，多具有颜色。这些黄酮糖甙类物质的结构又包括甙和甙元两类，植物界中的黄酮类化合物大部分以糖甙的形式存在，一部分以游离甙元形式存在。这些物质对减少器质性病变，诸如癌症、动脉硬化的发病率起到了重要作用。

作为药理因子，黄酮类化合物具有降血压、降血脂、防止血栓形成、防治心脑血管疾病、增强免疫、降低血管脆性、改善心脑血管血液循环等作用。黄酮类化合物在体内代谢快，与维生素C相似，过多时通过尿液排出体外。黄酮类化合物由于代谢快，在体内不蓄积，需要经常补充。人体自身不能合成类黄酮，必须从食物中得到，食物来源是谷物、蔬菜、水果、果汁、茶叶等。

在国外，苷元型黄酮是黄酮类产品生产和研究的热点。目前在日本已经有多种苷元型黄酮的生产，其最有代表性的苷元型黄酮产品即为大豆异黄酮苷元的生产。技术上采用化学法或生物转化方法。化学法产品质量差，副产物多。在国内，糖苷型黄酮的生物转化和苷元型黄酮的研究和生产的报道很少。为了充分提取不同极性的黄酮化合物，在实际生产中通常采用极性低的有机溶剂或水提等方法。由于对医药产品和保健品的安全要求，醇水多成为常用提取溶剂，提取效率往往偏低。为了解决这些问题，需要确立高效清洁的植物提取技术。近年，酶法提取药用植物已成为中药提取研究的重要方法。由于植物茎叶中的总黄酮几乎都被以纤维素为主体的细胞壁所包围，这些细胞间尚有原果胶粘结，因此，应用以纤维素酶和果胶酶为主的复合酶液对植物叶进行酶解，然后提取，可以大大提高总黄酮得率。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种酶法提取植物黄酮化合物的方法，本方法成本低廉，总黄酮得率高，适于工业化生产。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种酶法提取植物黄酮化合物的方法，步骤如下：

(1)浸提：将植物叶片粉碎成叶粉，将该叶粉装入萃取罐，加入溶剂进行提取。其中酶解水提一遍，醇提二遍，具体为：

第一遍：酶解水提：加入为原料六倍量体积的水，以及为原料重量0.1-0.5％的复合酶，保持温度50℃，提取2h，过滤；

第二遍：加入为原料五倍量体积的70％-80％的乙醇溶剂，提取温度70℃-80℃，提取2h，过滤；

第三遍：加入为原料五倍量体积的70％-80％的乙醇溶剂，提取温度70℃-80℃，提取1h，过滤；

合并第一遍和第二遍提取液，用脱味锅进行浓缩脱除乙醇溶剂，浓缩成为水溶液，放置沉淀3小时后进行离心分离，得到上清液；第三遍提取液直接沉淀即可，合并上清液；

(2)上柱纯化

取分离后的上清液以1BV/h流速上柱，然后用水冲洗，冲洗流速为2BV/h，弃去流出液，用70％乙醇溶剂0.8-1倍流速解析，换上80％乙醇溶剂后当流出液流出后开始接收解析液；

(3)处理解析液

将得到的解析液减压浓缩以除去乙醇，然后将浓缩液再加去离子水调整固形物含量，进行喷雾干燥，得到植物黄酮化合物产品。

而且，所述复合酶中果胶酶∶纤维素酶＝6-7∶3-4，为质量比。

本发明的优点和积极效果是：