[发明专利]同时检测食品中氟喹诺酮类药物和氯霉素类药物的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及本发明属于食品安全领域，涉及一种同时检测食品中13种氟喹诺酮类药物和3种氯霉素类药物的方法和建立13种氟喹诺酮类药物和3种氯霉素类药物的液质谱库的方法。

【背景技术】

氟喹诺酮(fluoroquinolones)是第三代喹诺酮类药物，该类药物对细菌的DNA螺旋酶(DNA-gyrase)具有选择性抑制作用，从而抑制细菌的DNA合成，导致DNA降解及死亡。该类药物抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透能力强，抗菌作用是磺胺类的近千倍，可与第三代头孢类抗生素相媲美。对水产鱼类的消化道及鳃细菌性疾病也有良好的防治作用，自八十年代起成为治疗鱼类疾病的主要抗菌药物，由于长期使用氟喹诺酮抗生素易导致动物群体体内致病菌产生耐药性，某些氟喹诺酮类化合物还可能有潜在的致癌作用，该类药物在动物性食品中的残留问题已经成为人们关注的焦点。我国以及世界卫生组织、欧盟、美国、日本等国家和组织都将氟喹诺酮类药物列入限制使用的兽药药物名单中，并制订出相关的最高残留限量MRL。随着国际间的技术壁垒的逐年增高，氟喹诺酮药物的残留限量迅速降低，水产品行业的风险正日益增加。在我国，恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氟哌酸、氧氟沙星等氟喹诺酮类药物在蜂产品中的残留量不得超过10μg/kg；美国联邦法规关于鲶鱼中氟喹诺酮的残留限量标准为5ppb，但阿拉巴马州和密西西比州作为美国鲶鱼加工的主要地区，则规定鲶鱼中不得检出氟喹诺酮残留，即“零限量”标准。日本肯定列表规定，在蜂产品中，

恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星四种氟喹诺酮类药物的限量均为2.5μg/kg；欧盟规定，恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星四种氟喹诺酮类药物的限量均为5μg/kg；美国和加拿大规定，氟喹诺酮类药物为养蜂业禁用药物，在蜂王浆中各种氟喹诺酮类药物MRL为5μg/kg。日本2006年5月29日开始实施“肯定列表制度”后，除有暂定标准的物质如双氟沙星、恩诺沙星、噁喹酸等外，其余沙星类药物均按10μg/kg的“一律标准”。06年广东省出口日本烤鳗恩诺沙星超标事件，07年美国、韩国对中国水产品氟喹诺酮药物预警事件等都对我国水产品行业造成重大损失，水产品中氟喹诺酮药物的残留问题已成为制约我国水产品生产和出口的一个重要因素。

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)，是广谱抗生素，常用于预防与治疗动物疾病，在水产品养殖业曾广泛使用。氯霉素存在毒副作用，能抑制骨髓造血功能，引起再生障碍性贫血、细胞减少性贫血、血小板减少和粒状白细胞减少。作为蛋白质合成抑制剂，会防碍红细胞的产生[1]。氯霉素使用对人类健康潜在的危害已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视。欧盟、美国等均在法规中规定CAP残留限量标准为“零容许量”(Zero tolerance)，即不得检出。甲砜霉素(Thiamphenicol，TAP)、氟甲砜霉素(Florfenicol，FF)与氯霉素同属于一类化合物。人们已知甲砜霉素、氟甲砜霉素的毒性很低，甲砜霉素作为氯霉素的可行替代品用于食用动物已获得公认。氟甲砜霉素是最新合成的此类化合物，在治疗那些已对其他抗菌素产生抗药性的传染病时，氟甲砜霉素可作为氯霉素和甲砜霉素的一种替代品。甲砜霉素的最大残留限量MRL(maximumrequired limits)值为50μg/kg，氟甲砜霉素的MRL值为100-3000μg/kg。氯霉素的最低要求执行限MRPL(minimum required performance limit)值为0.3μg/kg。

目前氟喹诺酮类药物和氯霉素类药物残留的测定方法可以概括地划分为微生物抑制法、免疫分析技术、色谱分析技术和液相色谱-质谱联用技术等。微生物抑制法是一种价格低廉、操作简便的初筛方法。但这种方法在较低限量水平时不够灵敏，且由于具备抑菌作用的抗生素种类繁多，干扰因素较多，假阳性较高。免疫分析技术灵敏度较高、快速简便，但存在交叉反应及假阳性问题。色谱分析技术最常见的有采用荧光检测的高效液相色谱法，近年来，随着液相色谱-质谱联用技术的发展，这种技术灵敏度高、定性准确，可实现多种物质的同时定量与确证，越来越广泛地应用在了氟喹诺酮类药物和氯霉素类药物残留的分析中。但该两类化合物需要分别检测，且缺乏谱库检索，本发明选择13种常见的氟喹诺酮类药物和3种氯霉素类药物为研究对象，建立该两类药物的LC-MS/MS(液相色谱-质谱联用)谱库，并利用谱库检索建立水产品中同时检测13种常见的氟喹诺酮类药物和3种氯霉素类药物的快速LC-MS/MS(液相色谱-串联质谱)筛选方法，这对保障我国水产品进出口安全具有重要意义。