[发明专利]蒺藜总皂苷的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及蒺藜提取物的检测方法，属于中药领域。

技术背景

白蒺藜(Tribulus Terrestris L)为蒺藜科蒺藜属植物，具有活血通络、平肝潜阳、祛湿化痰、宣痹通阳、补益肝肾等功效。历代本草多有记载，《本草纲目》日：“蒺藜气味苦温，其性宣通，治胸痹痞满，利肝肾。”《本经》载：“蒺藜主恶血，破积聚。”《本草再新》“益气化痰，散湿。”《本草汇言》谓其“去风下气，行水化瘀之药也。”蒺藜总皂苷临床已被应用多年以治疗心血管疾病。临床及实验药理学都证明可改善心功能、缩小心肌梗塞面积、缓解心绞痛的症状、延长心绞痛的发作间期、减少心绞痛的发作次数，对陈旧性心肌梗塞伴左室功能异常者亦能减轻其胸闷、气促和心悸等症状，增加左室收缩功能和排血量。

目前，现有技术并没有公开蒺藜提取物的指纹图谱的检测方法。

发明内容

本发明目的在于提供一种蒺藜提取物的检测方法。

本发明目的在于提供一种蒺藜总皂苷的检测方法。

本发明提供一种蒺藜提取物的高效液相-蒸发光散射指纹图谱检测方法，该方法包括如下步骤：

色谱条件：室温，相对湿度：25-40％；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60～90％乙腈溶液为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速：0.4～0.6ml/min，柱温：25～45℃；蒸发光散射检测器：漂移管温度：105～120℃，气体流速：1～3L/min。

所述色谱条件优选室温：20℃，相对湿度：35％；

供试品溶液的制备：称取蒺藜提取物适量，加水适量，超声处理5-20分钟，放冷，滤过，制成每1ml含3-6mg的溶液，即得；其中超声优选分钟10；优选制成每1ml含5mg的溶液；

测定法：精密吸取供试品溶液20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

本发明检测方法优选采用如下梯度洗脱：

所述蒺藜提取物为蒺藜的有机或无机溶剂提取物，包括但不限于醇提过柱精制物、水提过柱精制物、醇提物或水提物。

所述蒺藜提取物优选为：取蒺藜草分别加水5～15倍量，煎煮1～5次，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩放冷，加入乙醇，搅匀，静置，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释，滤过，滤液通过已处理好的大孔吸附树脂柱，再用水洗至流出液近无色澄清，继用60％～85％乙醇洗脱至洗脱液无苦味，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，得蒺藜提取物。

本发明提供蒺藜总皂苷的检测方法，该方法包括如下步骤：

色谱条件：室温，相对湿度：25-40％；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60～90％乙腈溶液为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速：0.4～0.6ml/min，柱温：25～45℃；蒸发光散射检测器：漂移管温度：105～120℃，气体流速：1～3L/min。

所述色谱条件优选室温：20℃，相对湿度：35％；

供试品溶液的制备：称取蒺藜皂苷适量，加水适量，超声处理5-20分钟，放冷，滤过，制成每1ml含3-6mg的溶液，即得；其中超声优选10分钟；优选制成每1ml含5mg的溶液；

对照品溶液的制备：精密称取蒺藜呋甾皂苷甲对照品适量，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

测定法：精密吸取供试品、对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

供试品指纹图谱中，指纹图谱应有10个共有峰，与对照品色谱峰相对应的8号峰为参照峰(S)，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积比值，相对保留时间：1^#0.35-0.43、2^#0.40-0.48、3^#0.40-0.50、4^#0.65-0.79、

5^#0.67-0.81、6^#0.83-1.01、7^#0.87-1.07、8^#1.00、9^#1.21-1.47、10^#1.30-1.60；相对峰面积：1^#0.4～1.0、2^#0.2～0.3、4^#0.2～0.4、6^#0.2～0.4、8^#1.00、10^#0.2～0.4。

本发明检测方法优选采用如下梯度洗脱：