[发明专利]一种具有免疫活性的南极海冰菌胞外多糖及其制备方法

权利要求书

1.一种具有免疫活性的南极微生物胞外多糖，其特征在于是指胞外多糖EPS-I，为白色絮状物，易溶于水和二甲基亚砜，相对分子量为60kDa，主要由阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖组成，其组成比为：阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖＝26∶40∶21。

2.用于权利要求1所述的一种具有免疫活性的南极微生物胞外多糖的制备方法，其特征在于该制备方法为：种子制备→深层发酵→制备发酵液→去除蛋白→分离纯化→冷冻干燥→多糖纯品。

3.如权利要求1或2所述的一种具有免疫活性的南极微生物胞外多糖的制备方法，其特征在于是多糖EPS-I的制备方法，从南极菌NJ-S2发酵液中分离提取的胞外多糖EPS-I的步骤如下：

a、种子制备：

培养基：蔗糖25g，豆粉12.5g，K₂HPO₄ 0.2g，Na₂SO₄ 0.1g，FeSO₄7H₂O 0.01g，CaCO₃2g，陈海水1000mL，pH值7.2，121℃灭菌20min；按5％的比例接入NJ-S2的菌悬液，10℃、120rpm，培养48h备用。

b、深层发酵制备胞外多糖发酵液：

培养基：蔗糖50g，豆粉25g，K₂HPO₄ 0.2g，Na₂SO₄ 0.1g，FeSO₄7H₂O 0.01g，CaCO₃3g，陈海水1000mL，pH值7.2，121℃灭菌20min。100L发酵罐的加料量为70L，按5％的比例接入NJ-B3种子液，发酵温度利用外接低温循环水控制，发酵温度利用外接低温循环水控制，罐内温度保持在10±1℃；向罐内通入压缩空气，以提供发酵过程中需要的氧气；不断搅拌，搅拌速度为250r/min，用灭菌的豆油作为消泡剂来消除在搅拌过程中产生的气泡。培养120小时，胞外多糖产量可达3.5g/L。

c、胞外多糖发酵液的后处理：将发酵液以10000r/min转速离心10min去菌体。将去菌体发酵液加入三倍体积的95％乙醇沉淀过夜后，以5000r/min离心收集沉淀。采用TCA法脱蛋白，南极菌NJ-S2胞外多糖溶液中加入1.5倍体积的10％TCA溶液，混合均匀，于冰箱中静置4～6h，再以5000r/min的转速离心15min，除去沉淀，保留上清液，如此反复处理数次，得多糖粗品。多糖粗品复溶，经过凝胶过滤层析和离子交换层析的方法进行纯化，冷冻干燥，得到多糖纯品。

4.如权利要求1或2或3所述的一种具有免疫活性的南极微生物胞外多糖及其制备方法，其特征在于所述的南极菌胞外多糖EPS-I单独使用，能够有效促进小鼠脾淋巴细胞增殖，提高小鼠细胞白介素II的分泌。