[发明专利]一种荧光假单胞菌DA4菌株及其获得方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于荧光假单胞菌菌种及其应用领域，特别涉及一种荧光假单胞菌DA4菌株及其获得方法和应用。 

背景技术

目前，亚麻工业生产上普遍采用传统的亚麻温水沤麻、雨露沤麻及天然水沤麻等方法，均利用天然微生物及其酶对亚麻的果胶、半纤维素和木质素等胶质进行降解，菌株混杂，难以进行有效的控制，导致脱胶时间长(温水沤麻约为4d；雨露沤麻为15-20d；天然水沤麻5-7d)、综合长麻率低、质量不稳定(束纤维强力低)和环境污染重等诸多问题，严重制约着亚麻产业的大力发展。值得注意的是，亚麻脱胶技术存在的不足使得纤维质量不佳，长麻率和梳成率较低、强度弱、可纺性差是目前制约亚麻纺织不能纺高支纱和生产高档产品的关键问题之一。尽管20世纪以来，不同的亚麻脱胶菌种如黑曲霉、真菌等被分离、纯化并用于亚麻脱胶。虽然将微生物及其产生的酶类应用于亚麻脱胶不仅可以提高纤维的产量和品质，耗能少、使用安全，可减轻对环境的污染，具有良好的前景，但是其产业化一直未能实现。荧光假单胞菌在自然界分布很广，在4℃时繁殖速度很快，其是奶类、蛋类在低温条件下保存导致腐败变质的主要细菌之一。虽然有关于荧光假单胞菌及其发酵培养方法的相关专利，但是其多用于促进作物生长及植物土传病害防治(CN200510112542.9)而未见其在亚麻等麻类纤维胶质分解中的应用报道。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种荧光假单胞菌DA4菌株及其获得方法和应用，本发明所筛选的荧光假单胞菌菌种繁殖速度快，抗污染能力强，耐热性和耐碱性能好；采用该复合脱胶酶液进行亚麻脱胶不仅大大缩短了脱胶周期，体系及培养过程操作安全，无毒性、无环境污染；采用其进行亚麻微生物脱胶可缩短亚麻脱胶周期、提高亚麻纤维的出麻率、提高亚麻纤维的强度、改善亚麻纤维质量，利于推广。 

本发明的一种荧光假单胞菌DA4菌株(CGMCC No.3839)，其特征在于：该菌株具有产果胶酶和半纤维素酶能力，具有亚麻脱胶活性。 

本发明的一种荧光假单胞菌DA4菌株的获得方法，包括： 

(1)从东海舟山海域取样腐烂海草，先将海草与富集培养基按1g∶20ml的比例于富集培养基中室温静置培养30天，然后取0.1ml富集培养基涂布于分离培养基，37℃分离培 养1～4天，获得自野生型脱胶优势菌株； 

其中，富集培养基配方为：亚麻粉5g，无菌水200ml，pH自然；分离培养基配方为：亚麻粉5g，(NH₄)₂SO₄ 5g，K₂HPO₄ 1g，MgSO₄ 0.5g，KCl 0.5g，FeSO₄ 0.01，琼脂20g，水1000mL，用NaOH将pH调节到9； 

(2)将步骤(1)中得到的菌株用滤纸片接种到果胶营养培养基中，28℃培养72h，带菌落形成后，加入0.2％刚果红水溶液染色4h，倒去表面剩余刚果红溶液，加入少量蒸馏水荡去薄层表面刚果红，对光即可见明显的绛红色水解圈，在菌落周围出现绛红色水解圈者即为果胶分解菌(测量果胶琼脂平板上菌周围的透明圈直径和菌落直径，水解圈与菌落直径之比大者一般有较高果胶酶活力)； 

然后将果胶分解菌用滤纸片接种到半纤维素营养培养基中，28℃培养72h，即可见水解圈(测量水解圈和菌苔大小，并计算二者大小之比，水解圈与菌落直径之比大者一般有较高半纤维素酶活力)； 

(3)通过透明圈法从上述培养基中选择出具有产果胶酶和半纤维素酶能力的菌株。 

所述步骤(2)中的果胶营养培养基，其组分包括： 

果胶             2g 

NANO3            3g 

K2HPO4           0.5g 

MgSO4            1g 

琼脂             20g 

水               1000mL 

pH               自然，7.0-7.2。 

半纤维素营养培养基，其组分包括： 

半纤维素(自制)    20g 

NH4NO3            2g 

K2HPO4            2g 

MgSO4             0.2g 

酵母膏            5g 

琼脂              20g