[发明专利]一种大白杜鹃组培快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种野生高山杜鹃种类的大白杜鹃组培快速繁殖方法，属于花卉培养技术领域。

背景技术

大白杜鹃是杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron L．)常绿木本植物，是我国特有种，主要分布在四川、云南、贵州、西藏、湖北、湖南等地，生于海拔1000～3200m的林下、灌丛中。大白杜鹃花大，花冠漏斗状钟形，白色或带蔷薇色，花梗具绿色或粉红色斑点，花开之时，有阵阵清香扑面而来，沁人心脾，观赏价值极高。大白杜鹃还是我国民间常用的中草药，其性味“苦，凉，有小毒”，具有调和经血、润肺清喉、益气宁神等功效。此外，大白杜鹃花瓣还可食用，富含多种氨基酸和维生素，味道精美、营养丰富。目前，对大白杜鹃的利用主要以采集野生资源为主，人为的乱采滥挖，使大白杜鹃生境遭到严重破坏，资源受到威胁。目前，现有的大白杜鹃种子繁殖和扦插繁殖技术因受资源和季节的限制，很难大规模育苗，并且现有技术还存在着培养周期较长、成活率较低、产量较低等问题。为了更好的保护、利用、开发大白杜鹃资源，研究大白杜鹃组培快繁技术具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种培养周期缩短、不受季节影响、并且产量较高的大白杜鹃种子胚组培快速繁殖方法，以克服现有技术的不足。

本发明的技术方案，本发明的一种大白杜鹃组培快速繁殖方法是采用组织培养技术对种子胚的子叶和胚轴进行愈伤组织诱导继而形成丛生芽而后分化成完整植株的一种组培快速繁殖方法，其过程包括下列步骤：

a、外植体的准备

取大白杜鹃尚未开裂的蒴果，在流水下用刷子刷洗蒴果表面，在超净工作台上用75%乙醇消毒30S，接种用0.1%升汞溶液消毒10min，无菌水冲洗1次，再用10%过氧化氢溶液浸泡3～5min，无菌水冲洗5～6 次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，备用；

b、无菌培养系的建立

将蒴果灭好菌后，用剪刀和镊子剥开蒴果，将种子抖撒在灭好菌的无菌种子萌发培养基上，然后在培养温度为25(± 1)℃、光照时间为12h·d^-1和光照强度为40～60??mo1·m^-2·s^-1的培养条件下进行培养；

c、丛生芽诱导和增殖培养

当种子全部萌发完毕，子叶全部展开时，将无菌苗分割成子叶和胚轴两部分分别接种到丛生芽诱导培养基上，其培养条件为培养温度25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度为40～60??mo1·m^-2·s^-1；

一个半月后，子叶出现伸长生长，变成2片真叶，子叶基部出现少量黄色愈伤组织；胚轴边缘开始隆起膨大，出现少量颗粒状黄色愈伤组织和绿色愈伤组织；2个月后，愈伤组织明显增大，子叶形成的愈伤组织分化出丛生芽，此时，胚轴形成的愈伤组织隐约可见大量绿色芽点，将丛生芽和胚轴形成的愈伤组织继续转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养；其培养条件为培养温度25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度40～60??mo1·m^-2·s^-1；继代增殖培养的间隔时间为1～2月，其繁殖系数可达6.5； 

d、丛生芽的伸长和壮苗培养

将丛生芽从愈伤组织上切割下来，丛生芽分割成小块转接到丛生芽伸长和壮苗培养基上，其培养条件为培养温度为25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度40～60??mo1·m^-2·s^-1；

在丛生芽伸长和壮苗培养基上，30天后芽苗生长健壮，单株丛生芽可伸长到2厘米左右，芽丛上的小芽苗可增长至1.0厘米；

e、试管苗生根诱导培养

将高2～3 cm的丛生芽苗切成单株后，接种到生根培养基上，其培养条件为培养温度25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度40～60??mo1·m^-2·s^-1；

50d后开始生根，生根率为60%～65%，70 d后苗高可达到4～5 cm，根数2～3条，将完整植株移栽到黄沙、珍珠岩、腐殖土混合的基质中进行炼苗培养即成。

上述无菌种子萌发培养基为1/4MS培养基、蔗糖30g/L、玉米素0.5mg/L、萘乙酸0.01mg/L。