[发明专利]一种大白杜鹃组培快速繁殖方法

权利要求书

1.一种大白杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于：采用组织培养技术对种子胚的子叶和胚轴进行愈伤组织诱导继而形成丛生芽而后分化成完整植株的一种组培快速繁殖方法，其过程包括下列步骤：

a、外植体的准备

取大白杜鹃尚未开裂的蒴果，在流水下用刷子刷洗蒴果表面，在超净工作台上用75%乙醇消毒30S，接种用0.1%升汞溶液消毒10min，无菌水冲洗1次，再用10%过氧化氢溶液浸泡3～5min，无菌水冲洗5～6 次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，备用；

b、无菌培养系的建立

将蒴果灭好菌后，用剪刀和镊子剥开蒴果，将种子抖撒在灭好菌的无菌种子萌发培养基上，然后在培养温度为25(± 1)℃、光照时间为12h·d^-1和光照强度为40～60??mo1·m^-2·s^-1的培养条件下进行培养；

c、丛生芽诱导和增殖培养

当种子全部萌发完毕，子叶全部展开时，将无菌苗分割成子叶和胚轴两部分分别接种到丛生芽诱导培养基上，其培养条件为培养温度25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度为40～60??mo1·m^-2·s^-1；

一个半月后，子叶出现伸长生长，变成2片真叶，子叶基部出现少量黄色愈伤组织；胚轴边缘开始隆起膨大，出现少量颗粒状黄色愈伤组织和绿色愈伤组织；2个月后，愈伤组织明显增大，子叶形成的愈伤组织分化出丛生芽，此时，胚轴形成的愈伤组织隐约可见大量绿色芽点，将丛生芽和胚轴形成的愈伤组织继续转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养；其培养条件为培养温度25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度40～60??mo1·m^-2·s^-1；继代增殖培养的间隔时间为1～2月，其繁殖系数可达6.5； 

d、丛生芽的伸长和壮苗培养

将丛生芽从愈伤组织上切割下来，丛生芽分割成小块转接到丛生芽伸长和壮苗培养基上，其培养条件为培养温度为25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度40～60??mo1·m^-2·s^-1；

在丛生芽伸长和壮苗培养基上，30天后芽苗生长健壮，单株丛生芽可伸长到2厘米左右，芽丛上的小芽苗可增长至1.0厘米；

e、试管苗生根诱导培养

将高2～3 cm的丛生芽苗切成单株后，接种到生根培养基上，其培养条件为培养温度25(± 1)℃、光照时间12h·d^-1和光照强度40～60??mo1·m^-2·s^-1；

50d后开始生根，生根率为60%～65%，70 d后苗高可达到4～5 cm，根数2～3条，将完整植株移栽到黄沙、珍珠岩、腐殖土混合的基质中进行炼苗培养即成。

2.根据权利要求1所述的大白杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于：无菌种子萌发培养基为1/4MS培养基、蔗糖30g/L、玉米素0.5mg/L、萘乙酸0.01mg/L。

3.根据权利要求1所述的大白杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于：丛生芽诱导培养基为1/4MS培养基、蔗糖30g/L、玉米素1.2～2.0mg/L、萘乙酸1.0mg/L。

4.根据权利要求1所述的大白杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于：继代增殖培养基为1/4MS培养基、蔗糖30g/L、玉米素1.2~2.0mg/L、萘乙酸1.0mg/L。

5.根据权利要求1所述的大白杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于：丛生芽伸长和壮苗培养基为1/4MS培养基、蔗糖30g/L、苯噻隆0.5mg/L、赤霉素1.0～2.0mg/L。

6.根据权利要求1所述的大白杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于：生根培养基为1/4MS培养基、蔗糖25g/L、吲哚丁酸1.0mg/L、萘乙酸3.0mg/L、活性炭0.8 mg/L。

7.根据权利要求1所述的大白杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于：在无菌种子萌发培养基、丛生芽诱导培养基、继代增殖培养基、丛生芽伸长和壮苗培养基以及生根培养基中都分别含琼脂10g/L和pH5.2～5.4。