[发明专利]一种从牡蛎中同步提取制备牛磺酸和生物锌及多肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物锌、牛磺酸、多肽等三种活性物质的提取分离制备，尤其涉及一种从牡蛎中同步提取这三种活性物质的方法。

背景技术

牡蛎是暖水性双壳类软体动物，其肉质鲜美，营养丰富，它富含糖元、蛋白质、氨基酸、维生素、生物锌、微量元素等成分，具有很高的营养价值。

牛磺酸是牡蛎中含量最高的氨基酸之一。牛磺酸又称为2-氨基乙磺酸，是一种非蛋白质结构的特殊氨基酸，是人体必需的重要氨基酸之一，以游离氨基酸的形式普遍存在于动物体内的各种组织。牛磺酸是氧化损伤的保护剂，能清除氧自由基、抑制脂质过氧化、维持细胞渗透稳定细胞膜、调节细胞钙稳定，同时还是中枢性神经递质，可调节中枢神经系统。在心血管系统中有心肌保护、抗心律失常等作用。牛磺酸在保护缺血脑细胞，预防白内障，降低血糖水平，降血脂，降血压，防止动脉粥样硬化以及预防老年疾病方面也起到了重要的作用。目前国内外主要依靠化学合成制取牛磺酸，但存在原料毒性大和环境污染等严重问题。而牡蛎产量高，牛磺酸含量丰富，无疑成为安全的天然牛磺酸资源之一。

牡蛎中含有许多有效成分并未损失的锌，而锌作为一种人体必需的微量元素，在体内具有多种生理功能，对小孩的生长发育至关重要，可以活化生物体内300多种的酶、促进机体发育及骨骼生长、调节细胞内酸碱平衡、促进味觉嗅觉的正常形成、维持皮肤健康、增强免疫机能、防止老化等。当体内缺乏锌时，将出现发育不全或发育迟缓、味觉障碍、骨骼生长缓慢、免疫力下降、先天性畸形等症状。锌参与机体蛋白质与核酸的代谢，对神经细胞至关重要，也是维持男性生殖系统健康的重要营养。

生物活性肽具有特殊的生理活性，主要体现在免疫活性、抗高血压、抗血脂、促生长活性、肿瘤抑制性活性等，常以非活性形式存在于构成蛋白质的氨基酸长链中。牡蛎中蛋白质等营养成分含量很高，是制备肽类功能性食品的良好海洋资源，通过生物工程技术，可从牡蛎中提取制备水溶性的牡蛎多肽。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种采用超声波破碎、离子交换、双酶水解、冷冻干燥等先进技术同步从牡蛎中提取生物锌、牛磺酸、多肽等三种活性物质的方法。

本发明采用的技术方案包括以下步骤：

a.生物锌的提取：将牡蛎肉放入容器中，加入1～3倍体积的纯水，然后用超声波破碎仪进行破碎，功率为60w～80w，时间为15～25min。由于生物锌主要是游离存在于牡蛎鲜肉中，此时采用超声波直接破碎整块的牡蛎鲜肉即可提取出来，部分游离氨基酸也同时被提取出来。

b.生物锌的分离浓缩：将所述的经超声波破碎后的牡蛎液离心分离取上清液，将上清液旋转蒸发进行浓缩，然后通过冷冻干燥的方式可得到生物锌的浓缩粉末，冻干温度为-30℃。

c.制备牡蛎浆液：在所述的牡蛎肉中加入1～3倍体积的纯水，捣碎匀浆。

d.水煮提取牛磺酸：由于牛磺酸为水溶性小分子，主要是游离分布于细胞内，因此将牡蛎匀浆后水煮即可提取出来。将牡蛎浆液控制在60℃蒸煮2h。将所述的牡蛎浆液离心取上清液，然后再加入1～3倍体积纯水，60℃蒸煮后取上清，重复3次，将上清液合并。

e.牛磺酸的浓缩：将所述的上清液采用旋转蒸发的方式减压浓缩，得浓缩液。

f.牛磺酸粗提液的制备：由于提取液中除牛磺酸还含有蛋白质、多糖、无机盐类等杂质成分，因此需要对样品进行纯化：在所述的浓缩液中加入相当于浓缩液十分之一体积的三氯乙酸溶液，浓度为10％。静置后沉淀取上清，然后将上清液调pH至4～5。

g.树脂吸附纯化：将所述的上清液用活化后的阳离子交换树脂进行提纯，用蒸馏水洗脱，收集牛磺酸部分的层析液。

h.牛磺酸的结晶纯化：将所述的层析液用旋转蒸发仪进行减压浓缩后，加入无水乙醇，使乙醇的终浓度达到60％～70％，然后于4℃静置结晶，即得牛磺酸晶体，多次重结晶后可得到高纯度的白色针状结晶，经干燥处理即得高纯度的天然牛磺酸。

i.多肽的制备①：在步骤d中离心得到的牡蛎碎肉中，加入3倍体积的纯水。调节pH至6.0～8.5，加热至40～55℃后加入碱性蛋白酶或中性蛋白酶，蛋白酶的加入量为牡蛎蛋白浓度的4％～8％(质量比)。酶解时间控制在2h，整个过程中温度和pH保持不变。酶解完成后将酶解液加热至90℃～95℃，保持10min，灭酶。