[发明专利]核酸适体衍生物及其在制备药物载体中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及核酸适体衍生物及其在制备药物载体中的应用。 

背景技术

肝癌是世界上最普遍的和高致命性的癌症之一。目前早期肝癌患者的有效治疗方法主要是手术切除和肝移植。传统的化疗对肝癌患者效果不好，并且传统药物由于缺乏对肝癌细胞的特异性，通常会给患者带来致命性的副作用。为了克服这些问题并提高化疗的选择性，需要研发在肿瘤区域特异性给药的靶向药物。 

肿瘤细胞靶向给药是提高肿瘤治疗效果减少毒副作用的有效途径。将药物偶联于肿瘤细胞特异性配体上是靶向给药的主要方法。例如将药物共价结合于细胞表面肿瘤标志物的单克隆抗体上，这些偶联药物的单抗能选择性结合肿瘤组织，从而提高抗肿瘤药物的效果，减少毒副作用。这类药物在临床前的试验中取得了很好的效果，目前正在进行相关的临床实验(Carter，P.J.；Senter，P.D.Cancer J.2008，14，154-169.Chari，R.V.J.Acc.Chem.Res.2008，41，98-107.)。例如人源化的CD33抗体-加里刹霉素偶联物Mylotarg，已经被批准用于急性骨髓系白血病(AML)的治疗。但是用于药物靶向输送的抗体来源于动物或融合的单克隆细胞，需通过生物过程产生，其制备繁琐，成本高，稳定性差，难以进行化学修饰和改造；同时抗体还具有分子量大、组织穿透力弱、易引起免疫反应等问题，限制了其广泛应用。寻找新的肿瘤细胞特异性识别分子取代抗体是靶向药物治疗的一个重要发展方向。 

核酸适体(Aptamer，又称核酸适配体，适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物靶标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是从SELEX(指数富集配基系统进化)过程中选择出来的。它们通过分子内碱基堆积、疏水相互作用、氢键和静电相互作用折叠形成独特的三维空间结构，从而与靶分子特异性结合(Breaker R R，Nature 2004，432，838-845)。核酸适体与靶分子结合的亲和力和特异性与单克隆抗体相似，甚至更强。与抗体相比，核酸适体具有较低的分子量(15-50bases；4-15kD)、快速组织通透性、没有免疫源性和毒性。核酸适体一旦筛选出来，就可以通过自动化的固相化学合成来制备，无需免疫动物或细胞培养的过程以及后续繁琐的分离纯化过程，价格大大降低。核酸适体很容易进行结构改造并标记上各种分子，如放射性元素、荧光染料等(Nutiu R & Li Y，Angew Chem Int Ed 2005，44，1061-1065；Liu，J.W.& Lu，Y.Angew Chem Int Ed 2006，45，90-94)。核酸适体稳定性高，可以可逆的变性与复性，可在常温下保存和运输。 

从靶向老鼠肝癌细胞的核酸适体中曾经筛选得到一条核酸适体序列TLS11a，如序列表的序列1所示(Shangguan，Dihua；Meng，Ling；Cao，Zehu i Charles；Xiao，Zeyu；Fang，Xiaohong；Li，Ying；Cardona，Diana；Witek，Rafal P.；Liu，Chen；Tan，Weihong，Identification of Liver Cancer-Specific Aptamers Using Whole Live Cells.Analytical Chemistry，2008，80(3)，721-728.。 

发明内容

本发明的目的是提供核酸适体衍生物及其在制备药物载体中的应用。 

本发明提供的核酸适体衍生物为式(I)或式(II)或式(III)所示的单链DNA； 

式(I)：5’-(CG)_n-核酸适体-3’；式(II)：5’-核酸适体-(CG)_m-3’； 

式(III)：5’-(CG)_t1-核酸适体-(CG)_t2-3’； 

所述核酸适体如序列表的序列1所示；n＝1-50；m＝1-50；t1＝1-50；t2＝1-50。 

n、m、t1和t2均为自然数。 

还可将所述核酸适体衍生物进行如下改造，也可以达到相同的靶向功能： 

(1)将核酸适体衍生物的骨架部分或全部改造为硫代磷酸酯骨架或对部分或全部骨架上的糖环进行2’-F和2’-NH₂修饰； 

(2)将核酸适体衍生物的部分或全部改造为肽核酸；