[发明专利]化学发光液,增强化学发光的试剂和方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学发光免疫分析。更具体地讲，本发明涉及含有增强剂的化学发光液，制备方法及试剂盒；增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的试剂和方法，制备方法及试剂盒。 

背景技术

化学发光免疫分析是世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术，是继酶免技术、放免技术、荧光免疫技术之后发展起来的一种超高灵敏度的微量检测技术。它具有灵敏度高、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染等优点，是目前免疫定量分析最理想的方法。 

在化学发光免疫分析中，常用发光物质包括鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、1，2-二氧杂环丁烷化合物(1，2-dioxetane compound)。其中异鲁米诺和吖啶酯作为示踪分子直接标记，属于闪光型化学发光反应。鲁米诺和1，2-二氧杂环丁烷化合物依靠酶作为示踪分子标记，属于酶促辉光型化学发光反应。1，2-二氧杂环丁烷化合物是最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，在适宜的缓冲液中，随着碱性磷酸酶的催化水解作用，1，2-二氧杂环丁烷化合物分解发出强度很高的光信号，信号可持续20个小时以上，是理想的化学发光物质。国外生产厂家研制出以碱性磷酸酶为标记物，1，2-二氧杂环丁烷化合物为底物的试剂盒，与之相匹配的有DPC、Beckman、BioMerieux、Olympus全自动化学发光系统。 

1，2-二氧杂环丁烷化合物中的CSPD，CDP，CDP-Star，BZPD 及其发光液，多数为国外公司Tropix，Lumigen等的专利产品，价格昂贵，大大限制了该项技术在国内的应用。国内能够提供的1，2-二氧杂环丁烷化合物——3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基)苯-1，2-二氧杂环丁烷(AMPPD)，其发光信号强度大大弱于上述国外产品。 

AMPPD的分子结构中存在一个-O-O-键很弱的四元杂环和一个磷酸根基团。磷酸根基团维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下，这种化合物很稳定，5℃下保存的固体AMPPD几乎不分解。当有碱性磷酸酶催化作用时，AMPPD发生磷酸根基团水解，形成一个不稳定的中间体。这个中间体随即自行分解，-O-O-四元环释放出大量能量，激发化学发光反应，发射光子。 

1989年，Schaap报道了利用十六烷基三甲基溴化铵和5-(N-十四酰)-氨基荧光素对1，2-二氧杂环丁烷化合物进行化学发光增强的技术(Clin.Chem.，35)。在美国专利US4959182和US5004565及中国专利CN89106249.1中，Schaap描述了在十六烷基三甲基溴化铵形成的胶束条件下，1，2-二氧杂环丁烷化合物进行化学和酶触发而导致的化学发光增强。 

美国专利US5145772公开了聚乙烯苄基二甲基苄基氯化铵(BDMQ)、血清白蛋白等大分子物质对1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强效应。美国专利US5547836公开了聚乙烯苄基三甲基氯化铵(TMQ)及聚乙烯苄基三丁基氯化铵(TBQ)可作为1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强剂。 

美国专利US5393469公开了聚合季膦盐对酶催化1，2-二氧杂环丁烷化合物所产生的发光增强作用。 

美国专利US5650099及中国专利CN1208399A公开了依靠双阳离子表面活性剂——三辛膦甲基-4-三丁基膦甲基苯二氯化物和荧光物——荧光素、羟基芘磺酸对1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强效 应。 

中国专利CN1719254A公开了一种以CSPD为底物，氯化十六烷三甲基铵、肉蔻酰甘油磷酸二钠、牛血清白蛋白、十八烷氨基荧光素为增强剂的化学发光液。 

上述专利中公开的1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强剂所使用的聚合物和长链烷基荧光物，价格昂贵，不易购买。 

因此，本领域需要开发更经济的化学发光液和增强1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的试剂和方法。 

发明内容

本发明一方面提供了一种化学发光液，含有1，2-二氧杂环丁烷化合物，还含有至少一种具有通式I结构的烷基二甲基苄基季铵盐， 

其中R选自C_8-20烷基或C_8-20烯基，优选C_12-18烷基；X^-为负离子，Y为苯环上的取代基，选自H、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基。 

本发明另一方面提供了这种化学发光液的制备方法及包括这种发光液的试剂盒。