[发明专利]1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从中药白及中提取分离1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法。

技术背景

中药白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.F.的干燥块茎，味苦、甘、涩，性微寒，具有收敛止血、消肿生肌的功效。白及不仅是常用传统中药，而且也广泛用于食品添加剂和化妆品方面。

鉴于缺少对照品，即使在新颁布的2010年版《中国药典》中，白及质量控制项下也仅有性状、鉴别和检查项，缺少相关指标成分的含量测定，难以精确控制其内在质量，在对中药白及的研究中发现，1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯在中药白及中含量较高，且在不同的产地中含量有一定差别，可以作为评价白及质量指标之一。该化合物其结构式如下：

何讯等人(HPLC测定白及中militarine含量[J].中国中药杂志，2009，34(16)：2076-2078)测定了不同产地白及中1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯含量，认为该成分可以做为白及药材质量控制的检测指标，也预示该化合物做为白及含量测定的对照品具有潜在需求。韩广轩等人(中药白及化学成分研究(II)[J].第二军医大学学报，2002，23(9)：1029-1031)采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，反复硅胶柱层析，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯。但是该方法是对白及化学成分的系统分离，不适合于针对1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的分离制备。而针对1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯进行分离的方法尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决中药白及质量控制中含量测定所需对照品，提供一种从中药白及中提取分离1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的方法。

本发明所提供的一种1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法，包括以下步骤：

(1)将白及药材粉碎成粗粉，按照白及粗粉∶溶剂＝1∶4～20(重量)的比例，回流提取1～8小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏，其中所述溶剂为甲醇或乙醇，浓度为30～80％；

(2)将上述白及流浸膏加水稀释，白及流浸膏∶水＝1∶4～10(重量)，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以20～80％乙醇为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到浓缩液，加硅胶混合均匀，硅胶加入量按白及粗粉∶硅胶＝1∶0.02～0.1(重量)计，室温干燥，得到干燥粉末；

(3)将上述干燥粉末转入层析柱，依次以不同比例氯仿-甲醇为洗脱剂进行洗脱，氯仿∶甲醇＝1∶0～0.2、1∶0.2～0.4、1∶0.5～0.9(体积)，依次收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品；

(4)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品进行凝胶柱层析，甲醇或水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品；

(5)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品进行反相硅胶柱层析，以甲醇-水洗脱，甲醇占水的30～70％(体积)，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分合并，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品。

上述步骤(1)中的白及药材选自兰科植物白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎。

上述步骤(2)中所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性大孔吸附树脂，优选型号为D101或AB-8型大孔吸附树脂。

上述步骤(3)和步骤(4)中薄层层析的显色条件为10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热显色。

上述步骤(4)中所述凝胶为葡聚糖凝胶或羟丙基葡聚糖凝胶，优选型号为Sephadex G-25或Sephadex LH-20型凝胶。

上述步骤(5)中所述反相硅胶优选型号为C8或C18型反相硅胶。

上述步骤(5)中高效液相检测条件：流动相为24％乙腈-水，检测波长为222nm。

本发明方法与现有技术相比具有以下有益效果：