[发明专利]拟脂联素多肽片段用于治疗缺血缺氧性脑病药物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞因子应用领域，更具体地说，涉及一种拟脂联素多肽片段用于治疗缺血缺氧性脑病药物的应用，特别适用于罹患高原脑水肿患者。

背景技术

急性高原病（AcuteMountainSickness，AMS）是指由平原进入高原或由高原进入更高海拔地区，在短期内（数小时至数日）发生的各种临床症候群，分为急性轻型高原病（急性高原反应）、高原肺水肿和高原脑水肿。其中，高原脑水肿（HighAltitudeCerebralEdema，HACE）多在海拔3700米以上高度发病，起病急骤，病情危重，常合并高原肺水肿、严重感染、心衰、多系统器官功能衰竭以及并发脑出血等，病死率高，成为目前高原病预防及治疗的重点。研究证明，血管源性水肿是HACE发生的主要病理基础，缺氧时毛细血管静压升高，可能通过机械作用使脑静脉破裂，血管通透性增加，牵张内皮细胞可能使血脑屏障开放增加而导致水肿形成。在特殊条件下，如战争或毁灭性自然灾害如地震时，大量人员快速集结进入高原，高强度运动时，由于没有充分的时间进行预防性教育及培训，以及无针对病因的治疗手段，HACE对此类人员的的影响将更为显著。

脂联素是一种由脂肪细胞分泌并释放入血液循环而发挥作用的细胞因子，它由22个胶原重复序列的柄和高度保守的gAd组成，正常人血浆中脂联素含量丰富，是一种与机体代谢密切相关的激素，具有降血糖、降血脂、胰岛素增敏等作用。近年的研究发现，它与动脉粥样硬化以及由此引发的缺血性心脏病之间也有一定关联。临床观察表明，血浆中脂联素水平与心肌梗死的发病危险性明显呈负相关，而糖尿病患者血浆中脂联素的水平会显著降低，另外，还发现脂联素具有直接的抗细胞凋亡的作用。而直接利用脂联素预防性注射入小鼠脑内后，可以显著减轻缺血后脑组织的水肿程度。这些结果提示脂联素可能具有直接的神经保护作用。而给这类患者补充外源性脂联素可能成为一种神经保护的治疗手段。

虽然目前人源性脂联素已经成功制备，但因其分子量较大，无法透过血脑屏障发挥其神经保护作用。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种拟脂联素多肽片段用于治疗缺血缺氧性脑病药物的应用，特别是高原脑水肿发生时，通过外源性给药，以减轻患者脑水肿损伤。

申请人根据脂联素氨基酸序列，利用蛋白质分析技术和多肽合成技术得到了拟脂联素多肽片段，其氨基酸序列如下：NH2-LQVYGDGDHNGLYADNVN-COOH ，并发现该该蛋白在体内能迅速通过血脑屏障，作用于脑血管内皮细胞，促进eNOS的磷酸化并增加NO的生成，在预防性给药后，可在急性缺氧条件下，保护脑血管内皮细胞并显著减轻急性缺氧后脑水肿的程度及范围。并采用SYBYL程序计算多肽片段分子模型并构建3D分子结构。合成的多肽片段腹腔注射小鼠后，可以有效地通过血脑屏障并和脑内脂联素受体结合而发挥类脂联素作用。

申请人研究表明，与全长的脂联素相比，拟脂联素多肽片段有着类似的生物学活性，而且给药后反应迅速，生物利用度好，有着更好的临床应用前景。

申请人在研究中发现：

1、人工合成的拟脂联素多肽片段腹腔注射或尾静脉注射小鼠后，可以有效地通过血脑屏障并和脑内脂联素受体结合而发挥类脂联素作用，并明显减小其缺血后的脑水肿范围。

2、拟脂联素多肽片段能够促进脑血管内皮细胞NO生成。

3、拟脂联素多肽片段能够促进脑血管内皮细胞eNOS磷酸化。

附图说明

图1是拟脂联素多肽3D空间结构：A：对照多肽片段；B:拟脂联素多肽：圆圈勾出部分为与脂联素受体结合位点。

图2是给予小鼠拟脂联素多肽腹腔注射后，可以明显减小其缺血后脑水肿范围图片。图中表示对不同处理组的脑组织TCC染色，（A）：未治疗组，（B）：拟脂联素多肽治疗组。

图3是给予小鼠拟脂联素腹腔注射，可促进脑血管内皮细胞NO生成。图中，Sham:对照组；Vehicle：缺血缺氧未治疗组，gAD:缺血缺氧前，拟脂联素多肽预防性治疗组。**与Vehicle相比，P<0.01。

图4是拟脂联素多肽促进脑血管内皮细胞eNOS磷酸化。图中，Sham:对照组；Vehicle：缺血缺氧未治疗组，gAD:缺血缺氧前，拟脂联素多肽预防性治疗组。**与Vehicle相比，P<0.01。

以下结合附图和发明人给出的实验及其结果对本发明作进一步的详细说明。

具体实施方式

1、拟脂联素多肽人工固相合成：

多肽的合成工艺分成了四个步骤，即粗肽合成、粗肽纯化、色谱肽粉、精烘包。

（1）粗肽合成：