[发明专利]中华鲟超低温冷冻精液人工授精方法

权利要求书

1.一种中华鲟超低温冷冻精液人工授精方法，其包括如下步骤：

(1)采集中华鲟雄鱼的精子，进行冷冻保存；

(2)轻压中华鲟腹部能挤出卵或发现中华鲟产卵时对冷冻精子进行解冻；

(3)卵子产出后，立即与解冻精子进行冻精人工授精，冻精授精采用不同激活溶液进行分步激活授精：即将300ml卵子加入5ml解冻精子快速混合，随即加入激活剂50ml激活，柔和搅拌20秒后，加入解冻精子5ml混合，20秒后加入10-20mM葡萄糖溶液混合搅拌，20秒后加入孵化用水搅拌，然后加入10％滑石粉脱粘，孵化用水冲洗后，将同批受精卵归并同一孵化筛中进行孵化。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将采集的精子经超低温冷冻直接投入液氮中保存。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，授精的水温度为18.8-19℃。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，精子的冷冻采用离心管和装有液氮的液氮罐，取活力大于90％的鲜精按体积比1∶3与2-4℃的抗冻稀释液混合，平衡10min，分装1.5ml离心管，采用二步降温法，即距液氮面上2-3cm处平衡10min后，直接投入液氮中冷冻保存。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，精子的解冻是将精液从液氮中取出，38-40℃水浴1min即可解冻，解冻后的精液在2-4℃冰箱存放。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的激活剂配方：

(1)10-20mM Tris，5-10mM NaCl，0.1-0.25mM KCl，pH 8.5；

(2)10-20mM D-Glucose。

7.根据冻精的生理特性和不同激活溶液的功能差异采用分步激活授精方法，有肋于提高冻精活力，提高冻精受精率。