[发明专利]红毛藻藻红蛋白分离纯化的方法

权利要求书

1.一种红毛藻中藻红蛋白的分离纯化方法，包括如下步骤：

(1)提取：将红毛藻以1∶20-25m/v比例溶于蒸馏水中，经过冻结-融解、搅拌、组织捣碎、超声波破碎后，过滤、离心，上清液为粗提液；

(2)盐析：向步骤(1)所得的藻红蛋白粗提取液中加入硫酸铵至其饱和度为35％-50％盐析，离心，收集沉淀并用磷酸缓冲液(K₂HPO₄-NaH₂PO₄)溶解，得盐析液，然后用30kDa分子量截留的超滤膜浓缩脱盐并去除分子量小于30kDa的杂蛋白；

(3)吸附分离解吸：脱盐后的浓缩液经阴离子交换树脂吸附分离，藻红蛋白吸附在树脂上，吸附后的树脂经混合梯度的磷酸缓冲液淋洗解吸藻红蛋白，得到藻红蛋白。

2.根据权利要求1所述的红毛藻中藻红蛋白的分离纯化方法，其特征在于：它还包括步骤(4)：树脂再生：磷酸缓冲液解吸后，树脂用2mol/L NaCl溶液淋洗4小时，再将树脂拆下，在0.1mol/L NaOH溶液中浸泡0.5小时，然后用大量蒸馏水清洗树脂至近中性，树脂再生完毕，可循环使用。

3.根据权利要求1所述的红毛藻中藻红蛋白的分离纯化方法，其特征在于：步骤(3)中所述的阴离子交换树脂为三乙基胺或四甲基胺的阴离子交换树脂。

4.根据权利要求1所述的红毛藻中藻红蛋白的分离纯化方法，其特征在于：步骤(3)中所述的磷酸缓冲液为pH＝5.6、含0.05mol/L NaCl的相同体积的0.02mol/L磷酸缓冲液和含0.2mol/L NaCl的0.2mol/L NaH₂PO₄溶液相混合组成线性梯度洗脱液，对已吸附藻红蛋白的阴离子交换树脂进行洗脱，收集洗脱液，获得纯化的藻红蛋白组分。