[发明专利]在轻度低温下能促进基因表达的序列

权利要求书

1.一种轻度低温转录调控元件，由选自以下的核苷酸序列组成：

gcccc gcc(SEQ ID NO：9)，

acccc gcc(SEQ ID NO：10)，

tcccc gtc(SEQ ID NO：11)，

tcccc gct(SEQ ID NO：12)，

tcccc gaa(SEQ ID NO：21)，和

tcccc ccc(SEQ ID NO：14)，

或与该核苷酸序列互补的核苷酸序列，

其中所述轻度低温是30-34℃的温度。

2.一种轻度低温转录调控增强子，其中相同或不同的权利要求1的轻度低温转录调控元件被连接。

3.一种轻度低温转录调控增强子，其中相同或不同的权利要求1的轻度低温转录调控元件通过其他核苷酸被连接。

4.一种载体，包含权利要求1的轻度低温转录调控元件或权利要求2或3的轻度低温转录调控增强子。

5.一种用权利要求4的载体转化的哺乳动物细胞。

6.一种筛选权利要求1所示的轻度低温转录调控元件的方法，包括：

1)提供在轻度低温下，能促进转录的基因；

2)克隆从位于该基因转录起始位点5`上游的1.5kb到该基因第一外显子的范围；

3)将所克隆的核苷酸序列和合适的启动子插入表达氯霉素乙酰转移酶(CAT)作为报道基因的载体中；

4)用所述载体转化哺乳动物细胞；

5)在轻度低温和37℃下分别培养细胞以表达报道基因，来获得能在轻度低温下促进报道基因转录的核苷酸序列；和

6)截短要被整合入载体的该核苷酸序列以鉴定对于在轻度低温下促进报道基因转录必需的核苷酸序列；

其中所述轻度低温是30-34℃的温度。

7.权利要求6的方法，其中步骤1)中所述的轻度低温为32℃的培养温度。

8.一种改良权利要求1所示的轻度低温转录调控元件的方法，包括：

1)合成突变的核苷酸序列，其中用其他核苷酸取代轻度低温转录调控元件中的一个或两个核苷酸；

2)将突变的核苷酸序列与合适的启动子整合入表达氯霉素乙酰转移酶(CAT)作为报道基因的载体中；

3)用所述载体转化哺乳动物细胞；

4)在轻度低温和37℃下分别培养细胞以表达报道基因，来鉴定在轻度低温下促进报道基因转录所必需的核苷酸序列；

其中所述轻度低温是30-34℃的温度。

9.一种在哺乳动物细胞中促进靶基因的转录和翻译的方法，包括下述步骤：

用包含轻度低温转录调控元件或轻度低温转录调控增强子的载体转化哺乳动物细胞；和

培养转化的哺乳动物细胞，

其中所述轻度低温转录调控元件由选自以下的核苷酸序列组成：

gcccc gcc(SEQ ID NO：9)，

acccc gcc(SEQ ID NO：10)，

tcccc gtc(SEQ ID NO：11)，

tcccc gct(SEQ ID NO：12)，

tcccc gaa(SEQ ID NO：21)，和

tcccc ccc(SEQ ID NO：14)，

或与该核苷酸序列互补的核苷酸序列，

其中所述轻度低温是30-34℃的温度，

且其中相同或不同的所述轻度低温转录调控元件在所述轻度低温转录调控增强子中直接或通过其他核苷酸被连接。