[发明专利]马铃薯离体培养一步成苗培养基及其优化方法及成苗方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种马铃薯离体培养一步成苗培养基，应用该培养基使马铃薯试管苗叶片一步成苗的方法，相应地，本发明也提供了一种优化该培养基的方法。

背景技术

马铃薯(Solanun tuberosum L.)是重要的粮、菜、饲料和工业原料兼农作物，在我国农业生产中占有相当重要的地位。为了创新种质资源，组织培养技术被广泛的应用于马铃薯育种研究中，并取得了显著成果。

植物组织培养一般是采用脱分化、再分化芽和生根壮苗等几个培养程序，称为多步成苗。为了简化培养程序，提高培养效率，人们研究建立了一种一步成苗的新方法。一步成苗又称一次成苗或直接成苗，是指外植体在一种培养基上同时完成脱分化和再分化过程，直接分化出完整植株的培养方法。组织培养一步成苗，已在烟草、小麦、水稻、大豆、棉花、辣椒等方面均有报道。目前以马铃薯叶片、茎段、叶柄、根等多种外植体进行了的再生植株培养，均采用多步成苗培养。其具体技术实施方案为：将马铃薯试管苗的叶片、茎段、叶柄、根等的外植体进行愈伤组织培养，诱导30d左右后进行愈伤组织的继代培养，再将愈伤组织转接分化培养基中再生植株，多步培养途径烦琐、再生率普遍较低且诱导时间较长。该一步成苗方法具有再生周期短，繁殖系数和再生频率高，易操作，培养程序简单等优点，马铃薯离体培养一步成苗未见报道。

发明内容

针对上述问题，本发明的一个目的是优化马铃薯离体培养一步成苗培养基的方法，该培养基使马铃薯试管苗叶片在形成愈伤组织后，不需要转移到分化培养基上，而是直接在原培养基上分化成苗，提高了马铃薯试管苗叶片愈伤组织的再生效率、缩短了培养时间、简化了操作步骤，为马铃薯优良种苗复壮快繁和品种改良提供了一条有效途径。

本发明的另一目的是提供一种马铃薯离体培养一步成苗培养基。

本发明的再一目的是利用上述马铃薯离体培养一步成苗培养基使马铃薯试管苗叶片离体培养一步成苗的培养方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：一种优化马铃薯离体培养一步成苗培养基的方法，该培养基使马铃薯试管苗叶片离体培养一步成苗，包括以下步骤：

(1)以不加任何激素的MS培养基作为对照，采用三因素三水平的L₉(3⁴)正交试验设计，在MS培养基中，添加不同浓度的6-苄氨基嘌呤、萘乙酸和2，4-二氯苯氧乙酸的不同组合，配制成马铃薯离体培养一步成苗培养基，其中6-苄氨基嘌呤浓度为：1.5mg/L、2.0mg/L和2.5mg/L，萘乙酸浓度为：0.1mg/L、0.2mg/L和0.4mg/L，2，4-二氯苯氧乙酸浓度为：0.0mg/L、0.1mg/L和0.2mg/L；将所得的不同激素组合的培养基置于培养瓶中；

(2)将马铃薯试管苗叶片接种在步骤(1)所述不同激素组合的培养基中；

(3)将步骤(2)所得的接种后培养基置于温度为22±2℃条件下，全黑暗培养7～10天后进行16h/d光照培养，光强为2000lx；

(4)光照培养20d后，统计愈伤组织诱导率及愈伤组织的形成情况，光照培养40d后统计愈伤组织分化率及成苗状况；

(5)分析步骤(4)所得的实验数据，以质优、量多、高分化率及成苗状况良好所对应的愈伤组织诱导培养基为优化的培养基。

一种马铃薯一步成苗培养基，使马铃薯试管苗叶片一步成苗离体培养，所述一步成苗培养基以MS培养基为基础培养基，并在1L MS培养基中，还需补加如下组分，并使各组分的终浓度如下：

6-苄氨基嘌呤           1.5～2.5mg/L；

萘乙酸                 0.1～0.4mg/L；

2，4-二氯苯氧乙酸                   0～0.1mg/L。

较佳地，所述的马铃薯一步成苗培养基，以1L MS培养基计，补加的各组分的终浓度为：

6-苄氨基嘌呤             2.0mg/L；

萘乙酸                   0.4mg/L。

利用所述的马铃薯一步成苗培养基，使马铃薯试管苗叶片离体培养一步成苗的培养方法，包括如下步骤：

(1)、提供所述马铃薯离体培养一步成苗培养基，并进行灭菌处理；

(2)、选取来源一致的马铃薯无菌试管苗，无菌条件下，切取顶端完全展开的叶片约0.5cm×0.5cm，以叶片背面贴于步骤(1)所述的培养基上；