[发明专利]用于抑制LeY糖抗原合成的岩藻糖基转移酶I的RNA干涉序列及重组干涉质粒无效
| 申请号： | 201010108936.8 | 申请日： | 2007-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN102094020A | 公开（公告）日： | 2011-06-15 |
| 发明（设计）人： | 张振波;闫杰;刘基巍;富力;王晓琦;燕秋 | 申请（专利权）人： | 燕秋 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/63;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 大连万友专利事务所 21219 | 代理人： | 王发 |
| 地址： | 116027 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 抑制 ley 抗原 合成 糖基转移酶 rna 干涉 序列 重组 质粒 | ||
1.一种用于抑制LeY肿瘤寡糖抗原合成的岩藻糖基转移酶I所构建的重组的岩藻糖基转移酶I干涉序列FUT1-1，其特征在于：其序列如下：TGGCCGGTTTGGTAATCAG。
2.一种用于抑制LeY肿瘤寡糖抗原合成的岩藻糖基转移酶I所构建的重组的岩藻糖基转移酶I干涉质粒，其特征在于：它是以RNA干涉载体pSilencer-4.1-CMV neo的多克隆特异酶切位点为基础，设计与干涉载体有相同粘性末端的FUT1 SiRNA模板的DNA序列，构建1个FUT1的含FUT1-1干涉序列的干涉质粒：pSilencer-4.1-FUT1-1。
3.一种用于抑制LeY肿瘤寡糖抗原合成的岩藻糖基转移酶I所构建的重组的岩藻糖基转移酶I干涉质粒的制备方法，其特征在于：①将合成的用于干涉FUT1基因的FUT1-1干涉序列的模板DNA，用去离子水或者TE缓冲液溶解，测定260nm的吸光值，并计算DNA浓度，②取溶解后的样品加入DNA退火缓冲液中，于90-98℃变性3-10分钟，冷却后低温保存备用，③对RNA干涉载体pSilencer-4.1-CMV-neo于37℃进行特异限制性内切酶消化，产生与干涉序列匹配的粘性末端，④酶切产物纯化后与②中制备保存的产物进行连接，⑤将上述连接产物转化感受态细菌并利用载体的抗性标记筛选阳性克隆子，⑥提取质粒后进行酶切鉴定，⑦用酶切鉴定正确的克隆子制备质粒。
4.一种用于抑制LeY肿瘤寡糖抗原合成的岩藻糖基转移酶I所构建的重细的岩藻糖基转移酶I干涉质粒，其特征在于：该重组的含FUT1-1干涉序列的岩藻糖基转移酶I干涉质粒作为制备抗肿瘤药物应用。
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