[发明专利]一种检测DNA碱基突变的方法

权利要求书

1.一种检测DNA中是否存在碱基突变的方法，依次包括以下步骤：

1)制备单链多核苷酸D1，所述D1与待测DNA的正常序列完全互补；

2)制备单链多核苷酸D2，用荧光素标记序列D2；所述D2能形成发卡DNA，茎环与D1完全互补，茎干与D1至少有6nt不互补，且茎干区含有限制性内切酶的酶切位点；

3)将D1和D2混合，再加入待测DNA，然后加入与D2茎干区的酶切位点相应的限制性内切酶，再加入下述式(I)的化合物；同时设置用待测DNA的正常序列组成的DNA片段取代待测DNA的体系作为对照；

按照如下方法确定待测DNA是否存在突变：若待测DNA反应体系的I_424nm/I_527nm小于等于对照体系的2.57±0.05，待测DNA存在碱基突变；若待测DNA反应体系的I_424nm/I_527nm等于对照体系的3.8±0.11，待测DNA不存在碱基突变；所述I_424nm为发射波长为424nm的发射峰的荧光强度；所述I_527nm为发射波长为527nm的发射峰的荧光强度；

式(I)；

式(I)中，m＝1～10，n＝2～100；R₁，R₂，R₃，R₄＝C_XH_2X+1或-O(C_XH_2X+1)，x＝1～10；R₅＝C_XH_2X+1，x＝1～3；R₆＝Br、Cl、I、CF₃COO或CH₃COO。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述式(I)中，m＝6、n＝6、R₁＝H、R₂＝H、R₃＝H，、R₄＝H、R₅＝CH₃、R₆＝Br。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述式(I)中，m＝6、n＝6、R₁＝H、R₂＝H、R₃＝H，、R₄＝H、R₅＝CH₂CH₃、R₆＝I。