[发明专利]使用包含特异性配体的亲和树脂的抗体纯化方法

权利要求书

1.一种用于抗体纯化的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在促进所述抗体的一部分与亲和树脂结合的条件下，使含有所述抗体的溶液或悬液与所述亲和树脂接触；

(b)任选用洗涤缓冲液洗涤含有结合抗体的所述亲和树脂；和

(c)用洗脱缓冲液洗脱含有结合抗体的所述亲和树脂，并收集作为洗脱物的纯化抗体；

其中所述亲和树脂是在其上共价固定有一个或多个以下通式(I)的配体的固相材料：

其中i＝1，2，...，m，

其中j＝1，2，...，n，

其中n和m独立地为范围在0-3的整数，前提条件是n+m之和在1-4的范围之内，

其中p、q和r独立地为范围在0-6的整数，

A11，...，A1m和A21，...，A2n独立选自α-氨基酸部分、β-氨基酸部分、α-氨基磺酸部分和β-氨基磺酸部分，

Z1和Z2独立选自氢、C_1-6烷基、羧酸部分(Z-C(＝O)-)和磺酸部分(Z-S(＝O)₂-)，其中Z选自氢、任选取代的C_1-12-烷基、任选取代的C_3-12-环烷基、任选取代的C_1-12-烯基、任选取代的C_1-12-炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环基，

R1和R2独立选自氢和C_1-6-烷基；

X是用于将所述配体与所述固相材料连接的基团，无论是直接连接还是通过接头连接，X选自羧酸(-COOH)、羧酸酯(-COOR)、羧酸酐(-COOCOR)、羧酸酰卤(-COHal)、磺酸(-S(＝O)₂OH)、磺酰氯(-S(＝O)₂Cl)、巯基(-SH)、二硫化物(-S-S-R)、羟基(-OH)、醛(C(＝O)H)、环氧化物(-CH(O)CH₂)、氰化物(-CN)、卤素(-Hal)、伯胺(-NH₂)、仲胺(-NHR)、酰肼(-NH＝NH₂)和叠氮化物(-N₃)，其中R选自任选取代的C_1-12-烷基，Hal为卤素；和

不包括“X”和任何接头的所述配体的总分子量为200-2000g/mol。

2.权利要求1的方法，其中

A11，...，A1m和A21，...，A2n独立选自甘氨酸、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-酪氨酸、D-谷氨酰胺、D-酪氨酸、L-缬氨酸、L-半胱氨酸、L-组氨酸和L-亮氨酸；

Z1和Z2独立选自3，3-二苯基-丙酰基、3，5-二-叔丁基-4-羟基-苯甲酰基、一-甲基-邻苯二甲酰基、3-(3，5-二-叔丁基-4-羟基苯基)丙酰基、苯甲酰基、2-噻吩-乙酰基、水杨酰基、4-叔丁基-苯甲酰基、3，5-二甲氧基-2-萘基、萘基、苯基-乙酰基和硫茚基；

R1和R2独立选自氢和C_1-6-烷基；

m为0或1，n为0或1，(p，q)为(0，1)、(0，2)、(0，3)、(0，4)、(1，0)、(2，0)、(3，0)或(4，0)，r为0。

3.权利要求1的方法，其中所述配体具有以下通式(II)：

4.权利要求3的方法，其中

p和q独立地为范围在0-6的整数，

其中i＝1，2，...，m，而m是范围在1-4、例如1-3、例如1-2的整数；

A11，...，A1m独立选自甘氨酸、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-酪氨酸、D-谷氨酰胺、D-酪氨酸和L-缬氨酸；

Z1和Z2独立选自3，3-二苯基-丙酰基、3，5-二-叔丁基-4-羟基-苯甲酰基、一-甲基-邻苯二甲酰基、3-(3，5-二-叔丁基-4-羟基苯基)丙酰基、苯甲酰基、2-噻吩-乙酰基、水杨酰基、4-叔丁基-苯甲酰基、3，5-二甲氧基-2-萘基、萘基、苯基-乙酰基和硫茚基。

5.权利要求4的方法，其中所述配体选自以下(1)-(12)：

6.权利要求1的方法，其中所述配体具有以下通式(III)：