[发明专利]包含抗体替代卡帕轻链序列的构建体和文库

说明书

发明领域

本发明涉及包含抗体替代κ轻链序列的构建体和文库。具体地，本发明涉及包含抗体替代κ轻链序列(任选地，与另一多肽诸如例如抗体重链和/或轻链域序列配偶的)的构建体及含有其的文库。

发明背景

由B淋巴细胞所生成的抗体(Ig)分子是由重(H)链和轻(L)链构成的。H和L链的氨基端域的氨基酸序列是可变的(V_H和V_L)，尤其在形成抗原结合位点的三个高变区(CDR1、CDR2、CDR3)处。H和L链的装配物通过L链的恒定区(C_L)和重链的第一恒定区(C_H1)之间的二硫键及通过V_H和V_L域之间的非共价相互作用而稳定化。

B淋巴细胞发育的各个阶段以Ig基因基因座的重排状态表征(参见例如Melchers，F.和Rolink，A.，《B-Lymphocyte Development and Biology》，Paul，W.E.编，1999，Lippincott，Philadephia)。在人和许多动物(诸如小鼠)中，编码抗体H和L链的基因是通过编码V区各部分的基因片段以规定的有序方式的逐步体细胞重排而装配的，其中μ重链在λ轻链之前(Burrows PD和Cooper MD，Curr Opin Immunol 9：239-44(1997)；Alt等，Immunol Today 13：306-14(1992)；Bassing等，Cell 109Suppl.：S45-55(2002))。

已知轻链(LC)重排由经由前B细胞受体(pre-BCR)驱动的信号启动，该受体由两条重链(μHC)与两条共价结合的由λ5和VpreB分子构成的替代轻链(SLC)联合而形成。如此，B细胞的前体(前B细胞)已经在骨髓中被鉴定为这样的淋巴细胞，它们生成μ重链，但是不是完全形成的轻链，而是表达一组分别称为VpreB(1-3)和λ5的B谱系特异性基因。

人VpreB1的主要同等型(CAG30495)是一种长145个氨基酸的多肽。它具有Ig V域样的结构，但是缺乏典型V域的最后的β链(β7)，并且具有与任何其它蛋白质没有显示序列同源性的羧基端末端。VpreB2具有数种同等型，包括142个氨基酸的小鼠VpreB2多肽(P13373)、和长171个氨基酸的小鼠VpreB2序列剪接变体(CAA019641)。VpreB1和VpreB2序列已经披露于EP 0 269 127和美国专利No.5,182,205；Collins等，Genome Biol.5(10)：R84(2004)；及Hollins等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(14)：5552-5556(1989)。人VpreB3的主要同等型是一种长123个氨基酸的蛋白质(CAG30496)，其披露于Collins等，Genome Biol.5(10)：R84(2004)。

VpreB(1-3)与另一种蛋白质λ5非共价结合。人λ5是一种209个氨基酸的多肽(CAA01962)，它携带与抗体轻链具有强烈同源性的Ig C域样结构和朝向其氨基端末端的两个功能上独特的区域，其中之一与Vλ域的β7链显示了强烈的同源性。人λ5样蛋白具有213个氨基酸(NP 064455)，而且与抗体λ轻链恒定区显示约84％的序列同一性。

关于进一步的详情，参见下列综述文章：Karasuyama等，Adv.Immunol.63：1-41(1996)；Melchers等，Immunology Today 14：60-68(1993)；及Melchers，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：2571-2573(1999)。

VpreB和λ5多肽一起形成非共价结合的Ig轻链样结构，其称为替代轻链(surrogate light chain)或假轻链(pseudo light chain)。在早期前B细胞表面上，替代轻链与膜结合Ig μ重链以二硫键连接，并与信号转导物CD79a/CD79b异二聚物结合以形成B细胞受体样结构，前B细胞受体(pre-BCR)。