[发明专利]用于诊断男性生育能力的方法和试剂盒

说明书

发明领域

本发明涉及用于诊断男性生育能力的方法和试剂盒。

发明背景

近15％的夫妻在初次怀孕尝试时会遭遇失败。过去20年的有关数据显示，这些临床病理中有大约30％单独出现在男性中，另有20％出现在夫妇双方均异常的人群中。因此，在大约50％的不孕夫妇中男性要负至少一半责任。

男性不育是一个影响大部分人的重要医学问题。大概半数的男性不育的原因甚至在全面检查后通常也显示不出任何确定的具体原因。

一般认为，与男性生育能力有关的主要因素中有三个因素对成功的授精是有害的：活动精子的数量或百分比、运动的速度及其方向。最常见的缺陷与精子的运动特点，尤其是精子向前运动的能力有关，这种运动由精子的尾部(鞭毛)的有效摆动控制和产生。这种运动或所谓的精子的前向运动力被大多数IVF实验室认为是男性生育能力最具有预测性的指标。

根据男性生育能力的世界卫生组织(WHO)标准，决定男性生育能力的主要因素是精液量、精子细胞密度、活动性、向前前进和形态。“正常”的WHO指标是每毫升一千万个活动精子。

传统上，前向运动力(向前前进)由有经验的实验室技术员通过样本的(光学)显微镜分析来确定和量化。样本经过观察并且精子细胞成分的几个方面经过量化，如活动百分比、密度、形态异常百分比和前向运动力。有大量用来评估样本中精子的运动力和数量的方法。如前所述，最普遍的方法就是显微镜分析法，此法一般在医院或商业性实验室中进行。最近，研制出了许多用以简化精子检测的试验用试剂盒。

WO95/29188公开了一种基于人精子SP-10抗原抗体的试验。EP-A-0387873公开了一种使用固体珠(solid bead)的试剂盒，这种固体珠同人精子细胞顶体特有的抗体相连。这种珠和样本混合在一起，进行培养、分离、清洗，并且检测与此珠相连的精子数量，优选在显微镜的辅助下得以测量和检测。WO97/40386公开了一种基于+kL，即基于人附睾精子蛋白质的免疫检测的试剂盒。样本中的精子在Dulbecco磷酸盐缓冲盐水中通过离心作用被清洗三遍。随后样本在95℃下加热变性，在14000g下产生离心作用，然后用上清液来进行分析。

近年来，用途单一并能完成精液基本分析的非处方产品成为可能。检测精液质量的比色分析法在本领域也众所周知。例如，国际公布第WO/2001/060968号申请公开了Genosis Ltd(英国，泰晤士河畔金斯顿)生产的以商标“Fertell”出售的产品。Fertell男性生育能力试验促使精子游上一个充满液体的腔，模仿精子设法到达卵的过程。用与胶体金相结合的抗-CD59单克隆抗体检测精子的存在。与抗体相连的精子被捆在硝化纤维素条上，同时未反应的缀合物则被冲离含有过量缓冲剂的条带。

国际公布第WO99/66331号申请公开了一种从样本中的非活动精子和/或活动性减弱的精子中分离活动精子或检测活动精子的方法和试剂盒。本发明的方法包括把一个精子样本放在一个厚度为25-2500微米的多孔层上，并且允许样本中的任何活动精子通过多孔层移动到检测带，在该检测带检测活动精子。

第2005287571号美国公布文本公开了用于根据与精子相关的EP2D水平评估男性生育能力的方法，并且还公布了用于评估男性生育能力的试剂盒。

发明概述

本领域的诊断用试剂盒和方法的主要缺点之一就是他们无法用简单、快速和精确的方法区分出样本中的活动和非活动精子。此外，许多已知的诊断用试剂盒所具有的组件增加了消费者所能使用的试剂盒的成本和/或不能用于家庭使用的程序。

现在，本发明的发明人已经成功地发明了一种用于检测是否存在具有所要求的前向运动力的精子并能进行量化分析的方法和试剂盒。本发明的方法和试剂盒与现存的或已知的用于诊断男性生育能力的方法和试剂盒相比，有下列优点：

(1)可以在医疗机构之外，在男性受试者的家里舒舒服服地使用本诊断方法，从而克服了原先不得不去上述机构获取分析样本的尴尬；

(2)本诊断方法的实施或分析(即样本中活动精子的存在与否)不需要医护人员的参与；

(3)诊断实施和结果的分析仅需要几分钟；

(4)本方法的成功实施不需要大量的精子；

(5)本诊断方法可以在受试者选择的任一时间实施；

(6)本诊断可以在夫妻关系的前期实施以允许他们确定是否存在生育问题。

(7)用来实施本发明方法所使用的试剂盒价格不高；

(8)本试剂盒既可以用来确定男性的生育能力又可以用来确定有前向运动力的精子与没有运动力的精子的百分比；