[发明专利]突变体酵母及使用其的物质生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及对野生型酵母进行了使规定基因组成型表达这样的改变的突变体酵母及使用其的物质生产方法。

背景技术

使用酵母等生产目标生产物时，制作以能组成型表达的方式导入了与该目标生产物生物合成相关的基因的突变体酵母，在适当的培养条件下培养突变体酵母，从菌体内或菌体外回收目标生产物。另外，以乙醇以外的物质作为目标生产物时，优选减少大量产生的乙醇。到现在为止，为了降低乙醇生产能力，已制作出破坏存在于乙醇生产路径中的丙酮酸脱羧酶、醇脱氢酶等基因的菌株。然而，尤其如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)这种具有葡萄糖效应(Crabtree effect)的菌中，降低乙醇生产量时其繁殖、发酵能力也大幅度的下降，存在实用性低这样的问题。(非专利文献1：Ishida，N.et al.(2006)Biosci.Biotechnol.Biochem.70，p1148-1153；非专利文献2：Flikweert，M.T.et al.(1996)Yeast 12，p247-257、非专利文献3：Eri，A.etal.(1998)J.Ferment.Bioeng.86，p284-289；专利文献1：特表2003-500062号公报；专利文献2：特表2001-516584号公报；非专利文献4：Skory，C.D.(2003)J.Ind.Microbiol.Biotechnol 30，p22-27)。另外，根据非专利文献1、非专利文献3以及非专利文献4，即使通过破坏乙醇生产路径的基因而能大幅度降低乙醇，所降低部分的大部分也未必都变成目标生产物。

另一方面，也有通过将乙醇生产路径的阻断限于一部分，并增强目标生产物的代谢路径，从而提高目标生产物收率的报告(非专利文献5：Saitoh，S(2005)Appl.Environ.Microbiol.71，p2789-2792)，然而，目标生产物的收率虽然得到了提高，但存在乙醇的降低不充分，发酵速度也稍微下降这样的问题。

专利文献1：特表2003-500062号公报

专利文献1：特表2001-516584号公报

非专利文献1：Ishida，N.et al.(2006)Biosci.Biotechnol.Biochem.70，p1148-1153

非专利文献2：Flikweert，M.T.et al.(1996)Yeast 12，p247-257

非专利文献3：Eri，A.et al.(1998)J.Ferment.Bioeng.86，p284-289

非专利文献4：Skory，C.D.(2003)J.Ind.Microbiol.Biotechnol 30，p22-27

非专利文献5：Saitoh，S(2005)Appl.Environ.Microbiol.71，p2789-2792

发明内容

所以，鉴于上述情况，本发明的目的在于提供一种突变体酵母及使用其的物质生产方法，其在使用酵母生产目标生产物时，能大幅度提高目标生产物的生产率的同时维持优良的生长速度以及发酵速度。

为了达成上述目的，本发明人等进行锐意研究的结果，发现了通过导入与目标生产物生产相关的基因并组成型表达HAP4基因，能够维持生长速度以及发酵速度的同时大幅度提高该目标生产物的生产率的事实，从而完成了本发明。

本发明包括以下内容。

(1)一种突变体酵母，导入了编码与目标生产物的生产相关的酶的外来基因、和能组成型表达的HAP4基因或其同源基因。

上述(1)的突变体酵母优选的是与野生型相比醇生产率降低了的突变体。例如，通过降低与醇合成相关的酶的酶活性而能降低醇生产率。在此，作为与醇合成相关的酶可举出丙酮酸脱羧酶和/或醇脱氢酶。作为上述丙酮酸脱羧酶可举出选自PDC1基因、PDC5基因和PDC6基因中的至少一个基因所编码的酶。作为上述醇脱氢酶，可举出由ADH1基因所编码的酶。另外，作为上述(1)的突变体酵母优选使用属于酵母(Saccharomyces)属的酵母，尤其是属于酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的菌株的酵母。另外，上述外来基因可举出编码具有乳酸脱氢酶活性的蛋白质的基因。

(2)一种使用酵母的物质生产方法，包含：培养上述的本发明的突变体酵母，在菌体内外生成目标生产物的工序；和回收上述目标生产物的工序。