[发明专利]脂多糖净化

说明书

本申请要求2008年1月7日提交的英国专利申请0800228.9的优先权，其全部内容参照纳入本文。

技术领域

本发明涉及脂多糖净化领域。

背景技术

当革兰氏阴性菌如大肠杆菌(Escherichia coli)及肠沙门氏菌(Salmonella enterica)倍增或裂解时，即释放脂多糖。它是一种强力细菌毒素，称作内毒素，是许多种与革兰氏阴性菌感染有关的毒性及致免疫效应的根源。内毒素是从细菌制备的质粒脱氧核糖酸中常见的污染物，因此必须在投入体内应用之前除去，以便防止任何不良炎症应答。类似地，必须对从革兰氏阴性菌制备而来的其它生物分子(例如革兰氏阴性菌荚膜多糖大肠杆菌衍生的重组蛋白)和药物用水进行纯化，去除残余内毒素。

因此，在纯化有生物医药用途的分子时需要能够选择性地去除脂多糖或内毒素。

发明内容

本发明提供用于在纯化有生物医药用途的分子的过程中选择性地去除脂多糖的材料和方法。

因此，本发明提供用于吸附脂多糖的膜，其包含可结合脂多糖的聚合物基材。较佳地，该聚合物基材至少对庚糖和2-酮基-3-脱氧辛酸(2-keto-deoxyoctonic acid)之一具有选择性。

本发明还提供一种制备结合脂多糖的聚合物基材的过程，所述过程包括以下步骤：

i.接触均相聚合物溶液和模板溶液；

ii.对所得溶液进行相转化处理；以及

iii.除去模板。

本发明进一步提供制备结合脂多糖的聚合物基材的另一种过程，所述过程包括以下步骤：

i.接触单体溶液和模板溶液；

ii.使单体中的交联基团反应形成聚合物；以及

iii.除去模板。

较佳地，各过程进一步包括制作膜的步骤。

除此之外，本发明提供一种从悬浮液中去除脂多糖的方法，包括以下步骤：

i.提供一种可结合脂多聚合物基材；以及

使所述悬浮液接触聚合物基材。

附图简述

图1显示了在用Kdo印迹膜和非印迹膜过滤后的内毒素回收％。方块是MIM的；三角是NMIM的。X轴是滤液体积(ml)。

图2显示了在用重复使用的Kdo印迹膜和非印迹膜过滤后的内毒素回收％。实心条是MIM，空心条是NMIM。X轴是滤液体积(ml)。

发明详述

革兰氏阴性菌

本发明涉及衍生自革兰氏阴性菌的脂多糖。这些细菌中有许多品种是致病的，该特性与细菌细胞的脂多糖层有特别关联。革兰氏阴性菌包括但不限于：蛋白菌(proteobacteria)，包括埃希氏菌属(Escherichia)、沙门菌属(Salmonella)、以及其它肠杆菌科、假单胞菌属(Pseudomonas)、莫拉菌属(Moraxella)、螺杆菌属(Helicobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、蛭弧菌属(Bdellovibrio)、耶尔森氏菌属(Yersinia)、醋酸菌和军团菌属(Legionella)；蓝藻菌；螺旋体；绿色硫细菌和绿色非硫细菌。革兰氏阴性球菌包括淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)和粘膜炎莫拉氏菌(Moraxellacatarrhalis)。革兰氏阴性杆菌包括流感嗜血杆菌(Hemophilus influenzae)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、侵肺军团菌(Legionellapneumophila)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌、奇异变形菌(Proteus mirabilis)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)、和伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)。医院革兰氏阴性菌包括鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。

脂多糖

革兰氏阴性菌细胞膜的最外层主要地由脂多糖组成，不管衍生自何种细菌，其全部具有共同的基本结构，由称作脂质A的脂质成分以及亲水的杂多糖组成。脂质A提供将分子固定在膜内的锚，而多糖成分自表面凸出并与外部环境相互作用。