[发明专利]原发性肝细胞癌诊断试剂、试剂盒及防治药物

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤诊断及防治领域，具体涉及一种原发性肝细胞癌诊断试剂、试剂盒及防 治药物。

背景技术

原发性肝细胞癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，在消化系统恶性肿瘤中位居第三位，仅 次于胃癌和食管癌。我国每年大约有30万人死于原发性肝细胞癌，占世界肝癌死亡人数的 50％。值得注意的是，世界各地原发性肝细胞癌发病率均有上升趋势。原发性肝细胞癌的主 要临床表现为肝区的胀痛或钝痛，晚期会出现黄疸，临床诊断主要依靠临床表现和血清甲胎 蛋白的浓度，但具有典型临床表现的病例往往已经到晚期，且根据血清甲胎蛋白浓度难以鉴 别良恶性肝病，给原发性肝细胞癌的早期诊断和治疗带来很大的难度。

肝细胞癌早期一般采用手术切除治疗，中晚期大多采取多种方法联合治疗，主要有化学 治疗、放射治疗和肝移植。由于原发性肝细胞癌对放疗和化疗不敏感，而肝移植又受限于供 体肝短缺，造成肝癌病人的5年生存率很低。因此，探索新的治疗原发性肝细胞癌的方法势 在必行，而肝细胞癌的基因治疗正成为目前的探索热点。

在成年哺乳动物中，磷酸甘油酸变位酶以二聚体形式存在，其亚单位有B和M两种，分别 由不同的基因编码，分子量都为30kD。磷酸甘油酸变位酶有三种同工酶，BB型、MM型和MB型 。BB型同工酶(即通常所说的PGAM1)存在于成人脑、肝脏和肾脏中，为脑型同工酶；MM型 同工酶(即通常所说的PGAM2)存在于骨骼肌和心肌中，为肌肉型同工酶；MB型同工酶仅存 在于心肌。磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)是糖酵解过程中的关键酶，在2，3-二磷酸甘油酸帮 助下，催化3-磷酸甘油酸转化为2-磷酸甘油酸。到目前为止，未见有通过检测人磷酸甘油酸 变位酶1基因表达水平来实现早期诊断原发性肝细胞癌的诊断试剂及试剂盒的相关报道，也 未见有通过降低其表达水平达到防治原发性肝细胞癌的目的的相关报道。

本领域目前需要提供新的原发性肝细胞癌的诊断尤其是早期诊断的检测产品以及防治药 物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是目前原发性肝细胞癌难以诊断尤其是难以早期诊断和防治 。

本发明解决技术问题的技术方案是针对上述不足，提供一种可以早期诊断原发性肝细胞 癌疾病的诊断试剂。

其中，上述的可检测人磷酸甘油酸变位酶1基因的转录水平的试剂包括能特异扩增人磷 酸甘油酸变位酶1基因的mRNA的PCR引物。

进一步的，上述能特异扩增人磷酸甘油酸变位酶1基因的mRNA的PCR引物为如下引物对：

正义链：SEQ ID NO.1 5’-GCACCCACTCCCTTCATACAAT-3’；

反义链：SEQ ID NO.2 5’-ACGCAGGTTACATTCGTCTTCC-3’。

其中，上述可检测人磷酸甘油酸变位酶1基因的翻译水平的试剂也可以包括人磷酸甘油 酸变位酶1的多克隆抗体或单克隆抗体。使用时，这些多克隆抗体或单克隆抗体上最好耦联 有标记物，所述的标记物可为同位素标记物或荧光标记物。

本发明同时提供了能检测人磷酸甘油酸变位酶1基因表达水平的试剂在制备原发性肝细 胞癌检测试剂盒或生物芯片中的用途。

本发明还提供了一种可以早期诊断原发性肝细胞癌的诊断试剂盒或生物芯片。该原发性 肝细胞癌诊断试剂盒或生物芯片含有上述的诊断试剂。

本发明还提供了能降低人磷酸甘油酸变位酶1基因的表达水平的药物在制备防治原发性 肝细胞癌的药物组合物中的用途。

本发明的第二个目的是提供一种用于治疗原发性肝细胞癌的药物，该药物能降低人磷酸 甘油酸变位酶1基因的转录水平或翻译水平。

进一步的，上述能降低人磷酸甘油酸变位酶1基因的转录水平或翻译水平的药物可以是 化学药、中药、化学药物组合物、中药组合物或生物制品中至少一种。

进一步的，上述的生物制品是针对人磷酸甘油酸变位酶1的shRNA分子(发夹状RNA分子 )或能表达人磷酸甘油酸变位酶1的shRNA分子的载体。

其中，上述的人磷酸甘油酸变位酶1的shRNA分子具有SEQ ID NO.7所述的核苷酸序列：

5’-GGUGAAGAUCUGGAGGCGCUUCAAGAGAGCGCCUCCAGAUCUUCACC-3’。

其中，能表达上述shRNA分子的载体包括下述核苷酸序列：

SEQ ID NO.5所示的正义链：