[发明专利]一种产肠毒素性大肠杆菌ETEC-K99的噬菌体EK99-C及其应用

说明书

发明领域

本发明涉及一种噬菌体，特别涉及一种产肠毒素性大肠杆菌K99(ETEC-K99)的强裂解性噬菌体EK99-C，其分离物及其单一或混合使用在治疗幼畜腹泻、抗细菌感染以及环境净化杀菌方面的应用。 

发明背景 

产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)是幼龄动物(仔猪、犊牛、羔羊等)腹泻中常见而且重要的致病菌之一，此类大肠杆菌能借助于其所产生的菌毛抗原粘附于动物的小肠黏膜上，定居并产生肠毒素，从而呈现出致病作用。大肠杆菌致病力主要由黏附素性菌毛和肠毒素两类毒力因子构成。目前在各种动物中已发现并展开研究的大肠杆菌菌毛抗原主要有：K88(F4)、K99(F5)、987P(F6)、F41及F17等。在引起初生仔猪、羔羊和犊牛腹泻的肠毒素大肠杆菌中，K99是常见的粘附素，这些细菌表面纤毛能与小肠黏膜上皮细胞表面的特异性受体位点结合，使细菌吸附于肠黏膜表面并产生肠毒素，导致急性腹泻、脱水，最后衰竭死亡。 

K99粘附素是Smith等1972年从腹泻犊牛和羔羊中分离到的，定居于牛、羊、猪小肠中后段，是导致幼畜腹泻的主要元凶：在新生仔猪大肠杆菌引起的腹泻中，由大肠杆菌-K99引起的占30％以上；在初生羔羊中导致腹泻发病率高达35％，死亡率47％左右；犊牛腹泻是在生后0～3天感染毒性大肠杆菌而发病，一旦发病，80％就会死亡。可见，肠毒素性大肠杆菌感染幼畜导致动物急性腹泻，造成幼畜成活率低，大大影响了我国动物养殖的经济效益。该腹泻在养殖场发 病普遍、死亡率高，严重威胁了动物健康，阻碍了畜牧业的发展。每年此类疾病所带来的经济损失数以亿计，各养殖场为预防和治疗这些疾病，花费了大量的资金。 

而治疗这类疾病最常用的方法是用抗生素治疗，但随着大量耐药菌的出现，抗生素对各种细菌的抑菌效果已达不到预期的要求。尽管疫苗的开发给了大肠杆菌病治疗新的希望，但效果不错的进口疫苗价格昂贵，且由于大肠杆菌血清型较多，不同血清型抗原性不同，菌株之间缺乏完全保护，不能针对所有猪场流行的致病血清型，疫苗的应用存在很多局限性。 

因此，亟待研究开发一种新型的疗法和产品，以解决和应对细菌对抗生素耐药性问题，以控制细菌性感染疾病在动物间的感染和传播。 

噬菌体作为一种新兴的治疗方法，已经越来越受到国内外科学家的关注，美国医疗机构在1999年的国际噬菌体会议上预测，在未来的3-5年内，美国医院将使用噬菌体制剂治疗抗生素无法控制的感染。 

噬菌体是一类细菌依赖性病毒，可以吞噬、侵染细菌，并在菌体内繁殖使细菌裂解而杀灭细菌。其被发现于1个世纪以前，但随抗生素的发现，科学家几乎停滞了对噬菌体的研究。现今，随着细菌对抗生素抗药性和耐药菌株日益显现，抗生素的无效性日益明显，使得科学家又再度萌发了利用噬菌体来消灭病原菌的设想。 

噬菌体在溶解其特异性宿主细菌时十分有效，且杀死细菌的机制与抗生素不同，不易产生耐药性和残留，十分适合成为理想的“新作用模型”的新型抗菌剂，因此，各国研究机构都将其作为一种新型、天然、安全的防治细菌性疾病的生物杀菌剂而进行研究。