[发明专利]一种鸭肝炎抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体地，本发明涉及一种鸭肝炎抗体的制备方法。

背景技术

多流行于冬春季的鸭病毒性肝炎，是一种鸭急性接触性传播病。主要以运动失 调、转圈、两脚痉挛后踢，头向后背等神经症状为特征。病程急促，发病急，传播 快，常在发病后3～4天内死掉。但仅是流行于鸭雏期的一种急性传染病，故又称雏 鸭病毒性肝炎，尤其1～2周雏鸭最易感，发病多，其中个体大，强壮的鸭子死亡率高， 常在57％～95％左右，是威胁养鸭业的一种严重的疾病，不容忽视。防治本病的关 键应是尽早使雏鸭在易感期内获得保护力。对种鸭进行免疫接种，通过母源抗体使 雏鸭获得被动保护是一种有效的方法。以往的做法是用鸭高免血清对雏鸭进行免疫 接种。用鸭高免血清或康复血清对雏鸭进行被动免疫效果虽好，但血清制造手续繁 杂、产量低、成本高，不易满足生产需要。用鸭病毒性肝炎疫苗，对鸡进行多次免 疫，可获得安全、高效的卵黄抗体。鸡易于规模化饲养，产蛋率高，是大批量生产 卵黄抗体的理想动物。此外，应用异源动物鸡制备卵黄抗体，不但减少了同源疫病 传染的危险，也为研制其他疫病的异源高免卵黄抗体提供了有益的经验。

卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，由于卵黄中仅有IgG 类抗体，故称其为卵黄免疫球蛋白IgG(egg yolkimmunoglobulins)，简称为IgY。卵 黄抗体的研究始于19世纪末，1893年，Klemperer发现了卵黄中富含抗体；1934年 Jukes的实验证明母鸡血清中的抗体可以转移到卵黄中，从而为雏鸡提供被动免疫保 护。Patters等的试验证实，相对别的血浆蛋白，IgG被选择性的转运到卵泡中。1969 年，Leslie和Clem将这种抗体命名为IgY。

卵黄抗体的形成过程是：当机体受到外界特异性抗原(尤其是灭活抗原)的刺 激后诱发一系列的免疫应答反应，激发B细胞分化成能分泌特异性抗体的浆细胞， 分泌大量的特异性抗体进入血液中。同时在产蛋禽体内，血液中的特异性抗体IgG (所有亚群)由卵巢IgG受体的介导逐步进入到卵巢滤泡和输卵管中，并在卵黄中 蓄积起来，也正是由于这种卵黄累积作用，使卵黄中的IgG明显地高于血清中的含 量，而血清中的其他抗体(主要是IgM，IgA)与输卵管中的卵白白蛋白一起混入到 鸡蛋白中。

卵黄抗体在多种环境中有较高的稳定性，在低于75℃条件下，卵黄抗体具有良 好的热稳定性，90℃处理15min后，大部分卵黄抗体丧失结合活性，在pH＜4时， 仅有少量卵黄抗体失去活性。在pH4-12范围内，卵黄抗体的活性几乎不受影响，在 pH＞12时，卵黄抗体迅速失去结合活性。实验表明，卵黄抗体具有耐受反复冻融的 特性，即使经过5次冻融，其抗原结合活性几乎不受影响。在室温下可保存6个月， 4℃保存可达5年以上，活性仅下降5％左右。由于具有这些稳定的理化性质，所以 其的开发应用备受人们所关注。

除上述理化特性外，卵黄抗体还有其他重要的生物学特性。卵黄抗体浓度高于 血清IgG，单个卵黄(约15mL)含200mg左右的卵黄抗体，自卵黄中获得卵黄抗体 较实验动物血清方便。且卵黄抗体不与哺乳动物补体、Fc受体结合，也不与葡萄球 菌蛋白A(SPA)或链球菌蛋白G(SPG)结合，卵黄抗体还不与血清中的类风湿因 子(RF)结合，可提高免疫学检测的准确性。因而可用卵黄抗体检测粪便中的病毒， 因为粪便中经常含有大量SPA，用卵黄抗体检测可避免假阳性结果。卵黄抗体是独 特的IgG同种型抗体，同时哺乳动物组织结构较禽类组织具有高度免疫性，卵黄抗 体用于哺乳动物检测具有明显的优势，许多高度保守的抗原，在免疫动物后仅产生 极小的免疫原性，却可用卵黄抗体进行区分，因此卵黄抗体可用于兽医和人类免疫 学的检测。

杨树皮类脂(Poplar Bark Lipid，PBL)是从杨树皮中提取的一种橙黄色脂溶性 物质，富含大量的多糖、有机酸、甾醇、磷脂、甙类及维生素等物质。多糖类具有 促胸腺体液反应、刺激网状内皮系统，提高机体特异性免疫反应能力；有机酸具有 增强机体免疫功能的作用，能够刺激和促进单核吞噬细胞功能，对抗免疫抑制对免 疫器官的抑制作用；甙类能够加速抗体的产生、促进淋巴细胞转化和增强网状内皮 系统功能等作用。这些物质在动物体内协调统一，大大提高动物体的免疫机能。