[发明专利]融合蛋白及其制备方法、编码该蛋白的DNA序列、表达载体、宿主细胞、含有该蛋白的药物组合物

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含：

1)促胰岛素分泌素；

2)连接肽；以及

3)人IgG2 Fc突变体；其中

所述融合蛋白从N端到C端依次为促胰岛素分泌素、连接肽和人IgG2 Fc突变体。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述促胰岛素分泌素为重组促胰岛素分泌素。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接肽具有如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述人IgG2Fc突变体为人IgG2 Fc的第322位氨基酸Lys突变为氨基酸Ala而形成的突变体；优选地所述人IgG2 Fc突变体具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

6.一种分离的用于编码根据权利要求1至5中任意一项所述的融合蛋白的DNA序列，该DNA序列包含自5’到3’端的用于依次编码促胰岛素分泌素、连接肽和人IgG2 Fc突变体的DNA，优选地所述DNA序列具有如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

7.含有权利要求6所述的DNA序列的表达载体，优选地所述表达载体为真核表达载体，更优选地所述真核表达载体为将权利要求6所述的DNA序列插入pAAV2-neo的Kpn I/EcoR I位点而形成的。

8.含有权利要求7所述的表达载体的宿主细胞，优选地所述宿主细胞为CHO-K1细胞。

9.一种治疗糖尿病、优选治疗I型和II型糖尿病、与营养不良有关的糖尿病以及继发性糖尿病的药物组合物，其包含：

根据权利要求1至5中任意一项所述的融合蛋白；以及

药学上可接受的载体。

10一种根据权利要求1至5中任意一项所述的融合蛋白的制备方法，该方法包括：

提供用包含编码所述融合蛋白的DNA序列的表达载体转化的宿主细胞，培养转化后的宿主细胞，对培养物进行离心，然后将离心后的上清液依次用亲和层析法、离子交换层析法和分子筛层析法进行纯化，从而获得所述融合蛋白，其中所述亲和层析法优选使用rProteinA Sepharose FF亲和层析柱，所述离子交换层析法优选使用QSepharose FF层析柱，所述分子筛层析法优选使用Superdex 200柱。