[发明专利]一种提高可卡因检测灵敏度的方法

权利要求书

1.一种提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于用于可卡因检测的核酸适配体被断裂成三段，所述的方法包括如下步骤：(1)将可卡因与三段核酸适配体探针混合，使被测定的可卡因与适配体探针形成复合物；(2)进行荧光检测、电化学检测或颜色检测；所述的适配体为与靶标分子结合的DNA或RNA分子；靶标分子为蛋白质、DNA、小分子或金属离子。

2.按权利要求1所述的提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于颜色检测时包括的步骤为：

(1)将可卡因与三段核酸适配体探针混合，使被测定的可卡因与适配体探针形成复合物；(2)将反应溶液与纳米金溶液混合；反应溶液中核酸探针与纳米金的摩尔比大于100∶1；(3)加入含氯化钠的磷酸盐溶液，通过溶液颜色变化半定量判定可卡因的存在；盐溶液的加入量以区分含空白样品与含被测样品的纳米金在520nm与650nm处吸光度的比来滴定确定，逐渐增大盐溶液的用量，确定最佳值；可卡因的存在于否由紫外可见吸收定量分析。

3.按权利要求1或2所述的提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于被测定的可卡因与适配体探针形成的复合物具有双键DNA结构或双键RNA结构；三段适配体按等摩尔比混合。

4.按权利要求1或2所述的所述的提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于所述的三段核酸适配体的序列为5’-GGG AGT CAA GAA C、5’-GTT CTT CAA T和5’-AGT GGG ACG ACA。

5.按权利要求2所述的所述的提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于检测包括步骤为：

(1)可卡因标准样品的制备：在0.15M NaCl，25mM Tris-HCl，pH 8.0缓冲溶液中配置500μM、200μM、100μM、50μM、20μM、0μM浓度的可卡因溶液；

(2)200μM核酸探针3、200μM探针4、200μM探针5各0.5微升，与1.5微升含0.3M NaCl的50mM Tris-HCl缓冲液，混匀；

(3)取0.5微升步骤2混合溶液，加入不同浓度的可卡因溶液4.5微升，在常温下保存30min。从上述样品中各取2微升，分别加入100微升12±1nM的纳米金溶液，室温下保存5min，然后加入15微升含0.2M NaCl的10mM磷酸盐缓冲溶液，进行UV-vis吸收测量和拍照；

(4)根据520nm和650nm处的吸光度绘制可卡因检测的标准曲线。

6.按权利要求2所述的所述的提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于所述的纳米金为球形。

7.按权利要求6所述的提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于所述的球形直径为1～100nm。

8.按权利要求1～5中任一项所述的所述的提高可卡因检测灵敏度的方法，其特征在于在可卡因检测灵敏度为0.5μM。