[发明专利]一种分离脐带间充质干细胞的方法无效
| 申请号： | 200910195922.1 | 申请日： | 2009-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN102021144A | 公开（公告）日： | 2011-04-20 |
| 发明（设计）人： | 祝加学;沈尊理;秦金保;沈华;张兆峰 | 申请（专利权）人： | 上海市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/08 | 分类号： | C12N5/08 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 20008*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分离 脐带 间充质 干细胞 方法 | ||
1.一种分离脐带间充质干细胞的方法，其特征是，该方法包括下述步骤：
(1)将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；
(2)将步骤(1)中获得的脐带碎块，加入2-4倍于碎块量体积的质量/体积比为0.1-0.2％胶原酶NB4消化，消化温度为37℃，在摇床中振荡消化2-3小时；得混合物1；
(3)将步骤(2)得到的混合物1中，加入其体积1/4-1/2量的质量体积比为0.1-0.2％的透明质酸酶，37℃消化10-30分钟；得混合物2。
(4)将步骤(3)得到的混合物2中，加入等体积的质量体积比为0.01-0.02％乙二胺四乙酸磷酸盐溶液，37℃摇床振荡10-20分钟；得混合物3。
(5)将步骤(4)得到的混合物3，用100-200目滤网过滤，收集滤过液。
(6)将步骤(5)收集的滤过液以600g离心5-10分钟，弃去上清液，用DMEM培养基清洗2-3次，即获得脐带间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(1)中磷酸盐缓冲液含有60-120u/ml的青霉素。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(1)中磷酸盐缓冲液含有60-120u/ml的链霉素。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(1)中组织碎块的体积为0.5-1.5mm3。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(2)中0.1-0.2％的胶原酶NB4以DMEM为溶液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(3)中胶原酶NB4消化时间为2.5-3小时。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(3)中透明质酸酶消化时间为20-25分钟。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(5)中滤网为100-120目。
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