[发明专利]一种铜绿假单胞菌D10及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物保护领域，具体涉及一种铜绿假单胞菌D10及其制备方法与应用。

背景技术

玉米大斑病是由子囊菌门球腔菌属大斑刚毛球腔菌[Setosphaeria turcica(Luttrell)Leonard  et Suggs]所引起的以叶部产生大型病斑症状为主的玉米病害，其分布较广，危害较重，在世 界各地主要玉米产区该病害都有不同程度的发生和危害。据报道，在玉米大斑病严重流行的 年份和地区，可以导致玉米减产50％，甚至更多。

玉米小斑病是由子囊菌门旋孢腔菌属异旋孢腔菌[Cochliobolus heterostrophus Drechsler] 所引起的温暖潮湿玉米产区的重要叶部病害，主要危害叶片，也可危害叶鞘、苞叶、果穗和 籽粒，是国内外玉米上普遍发生的病害之一。据估计一般中等发病年份感病品种损失约10％～ 20％，严重时可达30％～80％，甚至毁种绝收。

目前，对玉米大、小斑病的防治主要是农业防治和化学防治。农业防治主要是通过栽培 抗病品种，但一些品种很容易失去抗病性，所以完全通过抗病品种来实现防治病害有一定的 难度。化学药剂防治虽然能有效的控制病害的发生和流行，但是长期的使用会对非靶标生物 产生直接毒害，造成对环境污染，严重影响了人类的健康和环境。因此，寻找新的无公害方 法已成为当务之急，生物防治方法将越来越受到重视。

拮抗内生细菌作为一种重要的生防菌，在植物病害生物防治中起着很重要的作用。其主 要优势在于：(1)细菌的种类和数量众多，在植物根际和地上部大量存在；(2)细菌对病原 菌的作用方式较广，可以通过竞争，拮抗和寄生，诱导植物产生抗性等方式对病原菌产生影 响；(3)具有惊人的繁殖速度；(4)许多细菌存在于植物根际和地上部，对植物的生态环境 较适宜；(5)细菌大多可以通过人工培养，便于控制，在实践中易操作；(6)有些细菌不仅 能防治病害而且还可以产生增收效应。

因此，从甜玉米健康植株内筛选获得对玉米大、小斑病有拮抗作用的内生生防细菌菌株， 对于玉米大、小斑病的防治具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种对玉米大、小斑病菌具有拮抗作用的 铜绿假单胞菌D10，该菌株可以有效抑制玉米大、小斑病，对玉米大、小斑病的防治具有重 要意义。

本发明的另一目的在于提供上述铜绿假单胞菌D10的制备方法。

本发明还有一个目的是提供上述铜绿假单胞菌D10在植物疾病防治中的应用。

本发明通过以下技术方案予以实现：

本发明铜绿假单胞菌D10，Pseudomonas aeruginosa D10，保藏于中国典型培养物保藏中 心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏号为CCTCC NO：M 209104。

所述铜绿假单胞菌D10在牛肉膏蛋白胨培养基上菌落呈棕色，圆形，有光泽，湿润，边 缘整齐，菌落直径0.2～0.5cm，菌体成短杆状，大小约为1.10um×0.57um，无芽孢。

所述铜绿假单胞菌D10具有以下生化特性：对玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、玉米弯孢 叶斑病菌、棉花黄萎病菌、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌和香蕉枯萎病菌有拮抗作用；其中， 枯草芽孢杆菌A16还对玉米大斑病菌和玉米小斑病菌有平板拮抗作用。

所述铜绿假单胞菌D10还具有固氮、促进植物生长、增强宿主抗逆性等生物学作用。

本发明铜绿假单胞菌D10的制备包括如下步骤：

(1)剪取待分离的玉米组织，消毒后用1％NaClO处理，再用无菌水冲洗；

(2)将经过表面消毒的玉米组织加无菌水研磨，按照梯度浓度依次稀释1×10²、1×10³、 1×10⁴倍，分别涂布于NA平板上，置于28℃恒温培养箱中培养；

(3)待平板长出菌落后，根据菌落的形态特征，挑取单个菌落，经划线、纯化后得到铜 绿假单胞菌D10，4℃冰箱保存在NA斜面上。

上述制备方法优选为如下步骤：

(1)剪取待分离的玉米组织2g，75％酒精消毒3min后，用1％NaClO处理10min，再 用无菌水冲洗4次，取最后一次冲洗液留做对照；