[发明专利]一种制备葵花籽粕蛋白水解肽的新方法及用途

说明书

技术领域：

本发明涉及生物工程领域，具体涉及保健食品生产和生物制药技术，特指以葵花籽粕 蛋白为原料，利用酶解技术制备水解多肽的制备方法及用途。

技术背景：

葵花籽油是是继棕榈油、大豆油和菜籽油之后的第四大食用油，葵花籽粕是葵花籽制 油时的副产物，其中含有29％-43％的优质蛋白质。但目前葵花籽粕一般仅用作饲料，没有 对其中的蛋白质作深加工利用。

现代医学研究证明，血管紧张素转换酶(Angiotensin I-converting enzyme，ACE) 在体内血压调节过程起重要作用。它使血管紧张素I转化为有升压作用的血管紧张素II并 使有降压作用的舒缓激肽分解，从而使血压升高。近年来人们从食品蛋白质开发出一类血 管紧张素转换酶抑制肽(ACE抑制肽)，给高血压患者服用后可以抑制体内ACE的活性， 达到降血压的目的。

在制备ACE抑制肽时，由于食品蛋白质在酶解为多肽的过程中产生大量的氢离子，但 是要保证酶的活性必须保持反应体系中的pH值相对稳定，因此需要不断加入盐酸溶液或氢 氧化钠溶液来维持体系的pH值恒定；如果酶解是在碱性或酸性的条件进行的，在酶解结束 后还需要加入大量的氢氧化钠溶液调节酶解液到中性。因此，在酶解后得到ACE抑制肽的 粗提物中存在一定量的钠盐成分(主要为氯化钠，一般含10％w/w左右)。高血压与年龄、 食盐的摄取、体重、遗传、性别、职业等多种因素有关。目前认为发生高血压的外在条件 是高钠盐的摄取，内在因素是肾脏功能的损伤。还有研究发现对食盐的摄取是动脉血压随 年龄而升高的条件。为此，一般高血压患者都需要防止钠盐的过量摄入。所以作为给高血 压患者服用的ACE抑制肽，在制备过程中必须进行脱盐处理。ACE抑制肽常用的脱盐方法 有活性碳吸附法、β-环糊精包埋法、大孔树脂吸附法和膜分离法等，不过处理起来都不仅 很耗时，还大大增加了成本，而且活性多肽成分的损耗也很大。

国内外关于从葵花粕中制备多肽仅有白羽等在《食品与机械》杂志报道过，但该论文 主要研究了酶解参数的筛选，没有对多肽制备的脱盐、干燥等重要过程进行研究，而且对 水解物也没有进行功能定位。关于制备低盐多肽的报道也很少，中国发明专利“低含盐量的 多肽生产方法”(申请号200610150150.6)采用三种蛋白酶顺次水解牛羊鲜骨的方法，反应 起始时用氢氧化钠调节pH到碱性，过程中不加碱液，使得水解物中盐含量较低；但这种方 法仍然加入了一定量的钠盐，而且由于水解过程不控制pH值可能导致酶解反应效率下降。

发明内容：

本发明的目的克服现有多肽制备技术因脱盐而造成工艺耗时长、成本高、多肽成分损 耗大等不足，提供一种使用Ca(OH)₂代替NaOH碱溶酸沉法提取蛋白及在葵花籽粕蛋白酶 解过程调节pH值、酶解结束中和酶解液中的酸，从而不需脱盐就得到低钠盐葵花籽粕蛋 白水解肽的方法。

本发明上述目的是通过以下技术手段实现的：采用碱溶酸沉法(以HCl溶液和Ca(OH)₂溶液调节pH值)制备得到葵花籽粕蛋白，再将葵花籽粕蛋白按一定比例溶解于水，再用 HCl溶液和Ca(OH)₂溶液调节pH值到蛋白酶最适作用值，加入一定量蛋白酶在其最适作 用条件下酶解适当时间，酶解结束后升温到90℃灭酶，再用Ca(OH)₂溶液调节pH值到中 性，通过过滤、浓缩和喷雾干燥得到粉状的葵花籽粕蛋白水解肽产品。

上述方法中所说的碱溶酸沉法制备葵花籽粕蛋白的方法为：将葵花籽粕按料液比 1∶8-1∶15(w/v)加入水，升温至40-60℃，搅拌均匀，加入1mol/L的Ca(OH)₂溶液调节溶液 pH保持在8.0-9.5，搅拌提取蛋白1-3h，用布袋离心机离心过滤，用1mol/L的HCl溶液调 节滤液pH值到4.2，静置过夜，离心，将沉淀物喷雾干燥得到葵花籽粕蛋白。

上述方法中所说的酶解底物葵花籽粕蛋白的浓度为2％-10％(w/v)。

上述方法中所说的酶解过程调节pH值的Ca(OH)₂溶液浓度为0.5mol/L-1mol/L。

上述方法中所说的酶解用蛋白酶为胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶或胃蛋白酶等 常见的商品蛋白酶的一种或者其中两种及两种以上蛋白酶的组合。