[发明专利]抗CD20抗体片段与力达霉素的融合蛋白、制备方法及其用途

权利要求书

1.融合蛋白，其选自下述序列之一：

(a)由SEQ ID NO：1或3所示的氨基酸序列构成的氨基酸序列；

(b)具有SEQ ID NO：1或3所示的氨基酸序列的生物学功能、且与SEQ ID NO：1或者3所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列构成的氨基酸序列；和

(c)具有SEQ ID NO：1或3所示的氨基酸序列的生物学功能，且经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸的SEQ ID NO：1或3所示的氨基酸序列构成的氨基酸序列。

2.权利要求1的融合蛋白，其还功能性地结合有式(I)所示结构的发色团AE：

力达霉素发色团结构式

(I)。

3.核酸分子，其编码权利要求1的融合蛋白的基因，其选自下述序列之一：

(a)SEQ ID NO：2所示的编码SEQ ID NO：1的核苷酸序列；

(b)SEQ ID NO：4所示的编码SEQ ID NO：3的核苷酸序列；

(c)编码权利要求1中(b)的氨基酸序列的核苷酸序列；

(d)编码权利要求1中(c)的氨基酸序列的核苷酸序列；和

(e)因为密码子简并性而分别与SEQ ID NO：2和4不同、但是编码与SEQ ID NO：2或4所示序列相同的氨基酸序列的核苷酸序列。

4.载体，其可操作地连接有权利要求3所述的核酸分子。

5.权利要求4的载体，所述载体是质粒。

6.宿主菌，其包含权利要求4所述的载体。

7.权利要求6的宿主菌，其是保藏号为CGMCC No.3125，于2009年06月17日送交中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏的名为IHPAYZ的大肠埃希氏菌。

8.权利要求6的宿主菌，其是保藏号为CGMCC No.3100，于2009年06月17日送交中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏的名为IMBPAYZ的大肠埃希氏菌。

9.制备权利要求2的融合蛋白的方法，包括以下步骤：

(a)将抗CD20抗体的Fab基因与力达霉素辅基蛋白LDP基因可操作地连接到质粒pCANTAB 5E中，得到重组表达质粒pCANTAB5E-Fab-LDP，或者将抗CD20抗体的可变区单链scFv基因与力达霉素辅基蛋白LDP基因可操作地连接到质粒pCANTAB 5E中，得到重组表达质粒pCANTAB 5E-scFv-LDP，

(b)在大肠杆菌HB2151中的诱导表达融合蛋白Fab-LDP、scFv-LDP，

(c)纯化及其复性步骤(b)中获得的融合蛋白，

(d)使步骤(c)中获得的融合蛋白与式(I)的发色团组装，

(e)任选地，其还包括测定步骤(d)中组装后的融合蛋白的生物学活性的步骤。

10.药物组合物，其中含有药学有效量的权利要求1或者2所述的融合蛋白，任选地，还含有药学上允许的佐剂。

11.权利要求1或者2的融合蛋白在制备用于肿瘤靶向治疗的药物中的用途。

12.权利要求11的用途，所述药物用于靶向杀伤淋巴瘤细胞。

13.权利要求11的用途，其中的淋巴瘤是裸鼠淋巴瘤或者人B细胞淋巴瘤。