[发明专利]稀土配合物荧光探针对金霉素药物的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及金霉素药物的检测方法，具体涉及一种稀土配合物荧光探针对金霉素药物的测定方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

金霉素(chlortetracycline，CTC)，化学名：6-甲基-4-(二甲氨基)-3，6，10，12，12a，-五羟基-1，11-二氧代-7-氯-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺盐酸盐。它是从金色链霉素的培养液中提取的广谱抗生素，对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体和大型病毒有广泛的抑制能力。虽然金霉素药效明显，但是其可在肝中富集，毒性反映主要表现为对内脏的损害；易在骨骼和牙齿中沉积，导致牙齿持久染色；还会出现肌肉酸痛等症状，甚至造成过敏反应、二次感染等作用。因此金霉素一般不用于人体，而被广泛用作抗菌促生长饲料添加剂。

金霉素作为饲料添加剂已被世界认可，且其效果也是确切的。但过量添加会造成动物组织中的残留，以及对周边土壤和水体的排放污染，使大多菌种产生抗药性，从而危害人体健康，因此许多国家对CTC残留例行监控。我国于1995年版药典规定金霉素含量测定方法为微生物检定法，但是该法步骤繁琐，实验周期过长。目前欧共体都采用了高效液相色谱(HPLC)法。HPLC法检测可靠，但是通过液相色谱检测的过程毕竟还是较为复杂。此外，还有如双波长分光光度法，斑点金免疫渗滤法，ELISA法等方法的报道。

荧光光度法因其具有灵敏度高、快速的优点已被广泛应用于该类药物的检测，但是荧光法在分析含有多种荧光物质的组分时，特别是存在波段重叠的物质时，会对目标产物造成干扰，无法得到令人满意的结果，因此，需要探索新的金霉素检测方法。

发明内容

本发明提供了一种快速、灵敏的稀土配合物荧光探针对金霉素药物的测定方法，利用稀土铽离子(Tb³⁺)与金霉素、十二烷基苯磺酸钠(SDBS)形成多元配合物，使铽离子发出的荧光大大增强，而SDBS选择性增敏该多元配合物体系发出的荧光，从而实现样品中金霉素药物的选择性测定。

一种稀土配合物荧光探针对金霉素药物的测定方法，包括以下步骤：

(1)配制Tb³⁺贮备液：将氧化铽(Tb₄O₇)溶于盐酸中，加水定容，配制Tb³⁺浓度为1.0×10^-3mol/L的Tb³⁺贮备液；

(2)将0.2mL～2.0mL pH＝7.5～8.0、氨基乙酸(即甘氨酸)的质量百分浓度为2％～10％的氨基乙酸-NaOH缓冲溶液，0.5mL～2.0mL Tb³⁺贮备液，0.5mL～2.0mL 5.0×10^-3mol/L的SDBS水溶液和含金霉素药物的待测样品混合，加水定容至10mL，摇匀后在室温放置15min～60min，得到Tb³⁺浓度为5.0×10^-5mol/L～2.0×10^-4mol/L的供试液；

(3)将供试液置于荧光分析仪中，设定激发波长为290nm～300nm，扫描速度为300nm/min～1000nm/min，激发狭缝宽度和发射狭缝宽度均为5nm～15nm，测定发射波长540nm～550nm处的荧光强度。

配制Tb³⁺贮备液时，盐酸的用量不必过多，只要能使Tb₄O₇溶解即可，具体操作可包括：将氧化铽溶于盐酸中，加热蒸发至近干，加水溶解并定容。

pH的影响：氨基乙酸-NaOH缓冲溶液的pH＜7.5时，随pH的增大，测试体系的荧光强度增强，当pH＝7.5～8.0时，测试体系的荧光强度达到最大并保持稳定，当pH＞8.0时随pH的增大荧光强度逐渐变弱。因此，选用pH＝7.5～8.0的氨基乙酸-NaOH缓冲溶液，调节测试体系的pH值。

由于常规的缓冲溶液如磷酸缓冲溶液、硼砂缓冲溶液、Tris缓冲溶液等有熄灭荧光的作用，本发明选用氨基乙酸-NaOH缓冲溶液来调节供试液的pH值，使供试液pH值趋于稳定，且不会影响测试结果。

所述的氨基乙酸-NaOH缓冲溶液的配制：将氨基乙酸溶于水中，用NaOH调节pH值即可。