[发明专利]一种皮肤组织工程种子细胞的扩增方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织工程种子细胞的培养方法，具体地说涉及一种用于构建组织工程皮肤或直接应用于烧伤及慢性溃疡的治疗的种子细胞培养方法。

背景技术

在烧伤及慢性溃伤口的治疗中，组织工程的方法一直扮演着重要的角色。正常伤口愈合的过程中，表皮细胞起着重要的作用，因此在创伤愈合过程中利用合适的方法将表皮细胞递呈到伤口处，是促进创伤愈合及诱导局部皮肤再生的重要方法。在组织工程中使用的方法中有培养的表皮细胞膜片、表皮细胞悬液、以及使用表皮细胞和/或成纤维细胞等与支架材料复合的组织工程皮肤等方法。1975年Rheinwald和Green(Rheinwald JG，Green H：Serial cultivation ofstrains of human epidermal keratinocytes：the formation of keratinizing coloniesfrom single cells.Cell 1975，6(3)：331-343.)利用3T3成纤维细胞作为滋养层，建立了表皮细胞培养技术后，1981年，O’Connor等应用此方法在体外培养出适于移植的人自体表皮细胞膜片，成功地修复2例烧伤后的肉芽创面。随后Limat等取自体毛囊外根鞘细胞(含毛囊干细胞)体外培养后移植到小腿溃疡创面，80％的患者在2～3周内创面由与周边皮肤相似的新生表皮覆盖。此后许多国家都有使用表皮细胞膜片治疗烧伤创面及慢性溃疡性伤口的成功报道，2008年基于表皮细胞膜片的产品Epicel通过了美国FDA的批准用于烧伤创面的治疗。这些表皮膜片使用成功的案例都说明表皮细胞在皮肤缺损的治疗中具有非常重要的作用，但是由于细胞膜片的缺乏真皮基质，伤口愈合质量不佳。

使用表皮细胞悬液的方法也是在组织工程中常用的治疗烧伤及慢性溃疡的方法，这种表皮细胞悬液可以是通过取自体的小块皮肤，经过胰酶消化后为经过进一步培养的表皮细胞悬液，具有代表性的商品是ReCell，Gravante G(Gravante G，Di Fede MC，Araco A，Grimaldi M，De Angelis B，Arpino A，CervelliV，Montone A：A randomized trial comparing ReCell system of epidermal cellsdelivery versus classic skin grafts for the treatment of deep partial thicknessburns.Burns 2007，33(8)：966-972.)使用经过ReCell处理的表皮细胞悬液对烧伤创面进行治疗，并与自体皮片移植作为对照，结果发现，表皮细胞悬液的窗口愈合速度不及自体皮片移植，但取皮处没有留下术后疼痛，总体的皮肤植入情况两组相似。另一种产品CellSpray则是将表皮细胞进行一段时间的扩增，一般为五天的时间，在将扩增后的表皮细胞悬液喷洒于创面，用于烧伤的治疗。Schlabe J(Schlabe J，Johnen C，Schwartlander R，Moser V，Hartmann B，Gerlach JC，Kuntscher MV：Isolation and culture of different epidermal and dermal cell typesfrom human scalp suitable for the development of a therapeutical cell spray.Burns 2008，34(3)：376-384.)将培养的表皮细胞膜片消化成单细胞悬液对烧伤创面进行治疗，也收到了良好的效果。这种细胞悬液用于治疗烧伤创面的成功进一步表明了角质细胞在伤口愈合中的关键作用。