[发明专利]一种不含明胶的疫苗冻干保护剂

权利要求书

1.一种用作水痘疫苗冻干保护剂的组合物，所述组合物所包括的各成分及其在冻干原液中的初始浓度为：人血清白蛋白3-20g/l、蔗糖30-100g/l、海藻糖10-30g/l、右旋糖酐10-50g/l、谷氨酸钠6-12g/l、尿素3-9g/l、精氨酸0.5-2g/l以及甘露醇10-100g/l，并且所述组合物中不含有明胶。

2.权利要求1所述的组合物，其中所述右旋糖酐为右旋糖酐70。

3.权利要求1所述的组合物，其中所述蔗糖在冻干原液中的初始浓度为40-60g/l。

4.权利要求1所述的组合物，其中所述海藻糖在冻干原液中的初始浓度为15-30g/l。

5.权利要求1所述的组合物，其中所述甘露醇在冻干原液中的初始浓度为10-20g/l。

6.一种冻干水痘疫苗的制备方法，其特征在于在冻干过程中采用权利要求1所述的组合物。

7.一种冻干水痘疫苗的制备方法，其特征在于在冻干过程中采用权利要求2-5任一项所述的组合物。

8.权利要求6所述的制备方法，包括下列步骤：

(1)以水痘病毒Oka株为毒种，MRC-5株人二倍体细胞为培养基质；

(2)用培养基对MRC-5株人二倍体细胞进行扩增传代，其中细胞传代比例为1∶2-1∶4，以37℃培养3-5天；

(3)待MRC-5株人二倍体细胞生长成均匀、致密的单层细胞后，更换培养基维持液并加入毒种感染细胞；

(4)当MRC-5株人二倍体细胞出现75％以上典型病变时，倒去原维持液，用相当于维持液2倍-3倍体积的洗涤液洗涤细胞表面；

(5)加入疫苗液收获细胞培养物，所述疫苗液为含有3-20g/l人血清白蛋白、30-100g/l蔗糖、10-30g/l海藻糖、10-50g/l右旋糖酐、6-12g/l谷氨酸钠、3-9g/l尿素和0.5-2g/l精氨酸的199综合培养基或PBS缓冲液；

(6)将细胞培养物经-70℃以下冻融、超声破碎细胞、经澄清过滤后，即为冻干原液；

(7)在所述冻干原液内加入10-100g/l的甘露醇，进行冻干。

9.权利要求8所述的方法，其中在步骤(3)中维持液为pH7.2-7.6、含2％-5％小牛血清的MEM培养基；和/或其中在步骤(3)中毒种与细胞接种比例为1∶60-1∶250；和/或其中在步骤(4)中洗涤液为Earle’s液或PBS缓冲液。

10.权利要求1至5任一项的组合物用于提高冻干疫苗的稳定性和安全性的用途。