[发明专利]云南铁皮石斛的一种组织培育方法

权利要求书

1.云南铁皮石斛的一种组织培育方法，其特征是包括：

材料：选择采自生长在云南的野生铁皮石斛优质成株，外植体为生长健壮的休眠芽和成熟的果实。

主要试剂：大量元素和微量元素以及铁盐、肌醇、甘氨酸、脯氨酸、各种维生素、植物激素。

组培条件：在温度为25℃±2，光照时间为12小时，光照强度为1000～2000μM m^-2s^-1条件下培养；

2.云南铁皮石斛的一种组织培育方法，其特征为步骤如下：

1.2.1培养基配制

基础培养基组分为MS(Murashige和Skoog，1962)培养基，碳源为1~3％蔗糖，支撑物为0.6-0.8％琼脂，pH为5.4~5.6，生根培养基中加入活性炭1g/L，根据不同的培养目的加入不同种类、不同的外源植物激素。

配制过程按照常规方法，培养瓶为玻璃瓶或透明塑料瓶。灭菌采用121℃灭菌30分钟高压湿热灭菌。

1.2.2外植体培养

取健壮铁皮石斛休眠芽，用75％的乙醇表面消毒1-3分钟，再用0.1％的升汞消毒10-15分钟，灭菌蒸馏水洗三次，每次10分钟。然后，将消毒的外植体接种萌发培养基上，置于光照培养箱中，在温度为25℃±2，光照时间为12小时，光照强度为90μM m^-2s^-1条件下培养。

1.2.3侧芽分化及继代

将萌发的小苗剪成1~2cm长短的带叶茎段，接种在不定芽分化和继代培养基中，在温度为25℃±2，光照时间为14小时，光照强度为100μM m^-2s^-1条件下培养。

1.2.4原球茎诱导

把无菌茎段切成小块，接种在诱导分化原球茎的培养基上，在温度为25℃±2，光照时间为14小时，光照强度为100μM m^-2s^-1条件下培养。

1.2.5不定根诱导

选取生长健壮、高度为1.5-3.0cm的无根苗，转接到生根培养基中，置于光照培养箱中，在温度为25℃±2，光照时间为10小时，光照强度为110μM^-2s^-1条件下培养。

3.云南铁皮石斛的一种组织培育方法，其特征为具体炼苗方法：

将获得的再生小苗在自然光照、温度条件下放置5-8天后，从生根培养基中取出再生小苗，用自来水洗去培养基。然后，将小苗移栽至树皮和砖块(按4∶1混合)基质上，并将其转移至温室中炼苗，前3~5天根据天气、温度、基质湿度情况，制定合适的浇水方案，保持温室的光照强度为200μMm^-2s^-1，气温为20-28℃，相对湿度为70-100％。