[发明专利]布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒

说明书

(一)技术领域

本发明涉及医学生物制品技术，具体说就是布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒。

(二)背景技术

免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。随着学科间的相互渗透，免疫学涉及的范围不断扩大，新的免疫学检测方法层出不穷。免疫学方法的应用范围亦在日益扩大，不仅成为多种临床疾病诊断的重要方法，也为众多学科的研究提供了方便。

抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，并在外界条件的影响下呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原(或抗体)检测未知抗体(或抗原)。试验所采用的抗体常存在于血清中，因此又称之为血清学反应(serological reaction)。

抗原种类繁多，按其物理性状可分颗粒性和可溶性两类。前者指细胞性抗原(包括细菌抗原)，其制备较为简便，一般用新鲜细胞以无菌生理盐水或磷酸缓冲液洗涤后配成一定浓度。若系细菌抗原，则取新鲜培养物，经集菌作如下处理，H抗原因不耐热用0.3％～0.5％甲醛处理，O抗原耐热可加热100℃2h去除H抗原后应用。可溶性抗原可以是细胞膜、细胞浆、细胞核及核膜等细胞组成部分，也可能是经细胞分泌至体液中的一些可溶性因子。细胞组成部分常需经过机械或酶解法等破碎、离心获得粗制抗原，并通过选择性沉淀或层析等方法进一步纯化。而体液中(如血清等)的可溶性抗原则可直接用生化手段获得所需成分。有些可溶性抗原仅具有免疫反应性，而无免疫原性，此类抗原尚需与载体偶联方可成为完全抗原。

布鲁氏菌病(Brucellosis)又称地中海弛张热，马尔他热，波浪热或波状热，是由布鲁氏菌引起的人畜共患性全身传染病，其临床特点为长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等。1886年英国军医Bruce在马尔他岛从死于“马尔他热”的士兵脾脏中分离出“布鲁氏菌”，首次明确了该病的病原体。1897年Wright与其同事发现病人血清与布鲁氏菌的培养物可发生凝集反应，称为Wright凝集反应，从而建立了迄今仍用的血清学诊断方法。我国古代医籍中对本病虽有描述，但直到1905年Boone于重庆对本病作正式报道。目前该病在世界分布，只有几个国家消灭此病，而在中国的东北，华北，西北一带有流行和分布，其它地区有散发，且日益广泛和危害严重。对畜牧业和人类来严重经济损失。

布鲁氏菌是一类革兰阴性的短小杆菌，内毒素是重要的致病物质。布鲁氏菌有强侵袭力，细菌可通过完整皮肤和粘膜进入宿主。布鲁氏菌有6个生物型，我国流行的是羊布鲁氏菌，牛布鲁氏菌和猪布鲁氏菌三种，其中以羊布鲁氏菌最常见。自然情况下，有60多种动物可感染布鲁氏菌，其主要是山羊，绵羊，牛和猪，以流产为主，孕期动物最为宜感。人类对布鲁氏菌易感，细菌进入人体后，迁延不愈，反复发作，发热呈波浪式，如不治疗，后果严重。

根据临床症状、流行病学特点和特征性病变，不难做出布鲁氏菌病的初步诊断，但由于在临床上小肠结肠炎耶氏菌、乙型副伤寒杆菌、大肠杆菌O:157感染存在相似的症状，必须借助实验室诊断技术才能对布鲁氏菌病进行最后确诊。为了建立适合本病诊断和流行病学调查的快速、敏感、特异、准确的方法，国内外许多学者进行了大量研究，并取得了显著的成绩。先后建立了病原鉴定、荧光抗体中和检等检测方法。我国目前应用虎红和试管凝集的方法，它们的敏感性及特异性差，是国际贸易淘汰的技术，且反应时间较长，与我国实际检测普查工作需求存在一定的矛盾。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种价格适中，反应时间短，与我国实际检测普查工作需求密切结合的布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒。

本发明的目的是这样实现的：它是利用平滑型布氏杆菌与粗糙型布氏杆菌的纯化脂多糖混合物作抗原包被酶标板，用S1119.3免疫健康牛制备阳性对照血清、标准弱阳性血清，用健康非免疫牛血清作阴性对照血清，以酶标记的与哺乳动物Fc段结合的受体--蛋白质AG作酶标记结合物，配以血清稀释液、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B、H₂O₂、终止液，组装组成。

本发明还有以下技术特征：

所述的抗原包被酶标板制备方法如下：

(1)菌种