[发明专利]牛蛙皮肤活性肽及其基因和在制药中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛蛙皮肤活性肽及其基因和在制药中的应用，属于生物医学领域。 

背景技术

自从青霉素发现以来，抗生素一直是人类治疗病原微生物感染疾病的有力武器，但是由于人类对″抗生素″的持续使用和滥用，导致很多细菌对现有的抗生素都产生了耐药性，所以寻找全新的机制杀伤病原微生物，且不易形成耐药性的新型抗生素已经成为目前研究的热点之一。两栖类动物皮肤多肽类不仅具有高效、广谱且不易产生耐药性等特点，在耐抗生素病原菌株不断出现的今天，已成为人们应对日趋严重的耐药性细菌的新型生物制剂的主要生物资源。相关研究结果显示，两栖类皮肤多肽目录呈现出超乎想象的分子和功能多样性。蛙科(Ranidae)是分布最广泛的两栖动物，几乎遍及各大洲，占据着不同的生态地位，为适应特定环境，它们皮肤的活性成分在种类和数量等方面，都是极其惊人的。 

在中国，很多两栖类动物被作为传统中药和民族药物而广泛应用，如中华蟾蜍(Bufo gargarizans)等。这些两栖类动物的皮肤和内脏具有广泛的药理活性和临床疗效。已报道药理活性有广谱抗微生物作用、抗肿瘤、镇痛、局部麻醉、免疫调节、心血管系统作用等。据国内外文献报道，已从各种生物来源分离得到不同的活性多肽，而且有些已进入临床治疗。例如从爪蟾(Xenopus laevis)皮肤分泌液获得的抗菌肽Magainin具光谱抗微生物作用，同时具有抗肿瘤活性，在美国已获准作为广谱抗菌药物，其基因工程产品已进入三期临床。 

目前我国科学家研究发现滇蛙皮肤具有极强的氧化自由基清除能力，并从滇蛙皮肤分泌液中发现了11个家族的抗氧化多肽。这些抗氧化多肽是由15～30个氨基酸组成的小肽。这些蛙类抗氧化多肽快速、强大的自由基清除能力可以最大限度地保护蛙类皮肤，使其尽可能少地受到日照、紫外线等诱导的自由基损伤，是皮肤保护、皮肤抗氧化领域的重大发现，对生物医学、抗氧化保护以及化妆品研发具有重要意义。牛蛙，原产于北美洲，1959年从古巴、日本引进我国内陆。目前我国主要靠养殖生产，全国各地均产，主要集中于湖北、湖南、江西、新疆、四川等地。 

发明人将本发明的牛蛙皮肤活性肽氨基酸结构经蛋白质数据库进行比较，未发现有任何相同多肽。发明人将本发明的牛蛙皮肤活性肽编码基因经数据库进行比较，与其它已发现的活性肽基因的同源性比较低。 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种牛蛙皮肤活性肽及其基因，为新的活性肽，具有广谱抗细菌功效。 

本发明还公开了牛蛙皮肤活性肽及其基因在作为制备病原微生物感染疾病的治疗药物的应用。 

本发明进一步公开了牛蛙皮肤活性肽及其基因在在制备抗氧化保护药物中的应用。

本发明的牛蛙活性肽基因，其cDNA由369个核苷酸组成，其自5′端至3′端序列为： 

atgttcaccatgaagaaatcgctgttactcctttttttccttgggaccatcaacttatct  60 

ttttgtgaaaaggagagaagagaaagagggaaacggatgatgagggtgatgaggaggaag 120 

actaaagttatttgggaaaaaaaggactttattggattatacagtattgattgaactggc 180 

tccattcgtggaatattgaaaaacaggctacaaattgtaacaatgaaaacaagccctatc 240 

cctgaacacccaaaaagagccaaagagtcgttactgtgacattcctacagccaataaacc 300 

ctactggaagcttacatcgtggtttatagttaagtctgaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa 360 

aaaaaaaaa                                                    369。 

本发明的牛蛙活性肽，其分子量为3144.8道尔顿，等电点为10.16；编码牛蛙皮肤活性肽的为97-171位核苷酸，其氨基酸序列为： 

Met Met Arg Val Met Arg Arg Lys Thr Lys Val IIe Trp Glu Arg Arg Asp Phe IIe Gly LeuTyr Ser IIe Asp。 

本发明牛蛙皮肤活性肽的制备过程，包括以下步骤： 

1)牛蛙皮肤活性肽基因的克隆：