[发明专利]雨生红球藻孢子破壁率的测定方法

权利要求书

1.一种雨生红球藻孢子破壁率的测定方法，其步骤是：

A、二氯甲烷-正己烷提取、测定虾青素含量，二氯甲烷-正己烷提取虾青素在室内进行，取雨生红球藻孢子粉，记为W₁_mg，放入10mL离心管中，加入5ml二氯甲烷-正己烷提取液，盖紧离心管盖，摇动离心管，使藻粉在提取液中分散均匀，在室温20-25℃下提取，提取过程间隔2-3分钟摇动离心管，使藻粉与提取液混匀，促进虾青素的提取；5000转/分钟离心，收集上清液；向离心管中加入5ml二氯甲烷-正己烷提取液，按上述方法重复提取一次，2次提取液合并到25ml容量瓶中，用二甲基亚砜定容，混匀后取1mL，放入10mL容量瓶中，二甲基亚砜定容后，用分光光度计，1cm光径比色杯，以二甲基亚砜为空白溶液，测量530nm波长光吸收值A₁，根据光吸收系数计算样品虾青素百分含量C₁：

C₁＝100％×(A₁×10×250)/1556 W₁；

B.二甲基亚砜提取、测定虾青素含量：取雨生红球藻孢子粉，记为W₂ mg，放入10ml离心管中，加入5ml二甲基亚砜，盖紧离心管盖，摇动离心管，使藻粉在提取液中分散均匀，70℃恒温水浴中提取，提取过程间隔2-3分钟摇动离心管，使材料与溶剂混匀，促进虾青素的提取；5000转/分钟离心，收集上清液；向离心管中加入5ml二甲基亚砜，按上述方法重复提取一次，2次提取液合并到25ml容量瓶中，用二甲基亚砜定容，混匀后取1ml，放入10ml容量瓶中，二甲基亚砜定容后，用分光光度计，1cm光径比色杯，以二甲基亚砜为空白溶液，测量530nm光吸收值A₂，根据二甲基亚砜溶解的虾青素溶液的光吸收系数计算样品虾青素含量C₂：

C₂＝100％×(A₂×10×250)/1556 W₂；

C.计算孢子破壁率：二氯甲烷-正己烷提取、测定的样品虾青素含量与二甲基亚砜提取、测定的样品虾青素含量的比值反映样品中破壁孢子与孢子总数的比例，即孢子破壁率，用公式计算孢子破壁率R：R＝C1/C2×100％；

所述的二氯甲烷-正己烷体积比是3∶1提取虾青素。