[发明专利]一种二十二碳六烯酸生产菌株及其诱变筛选方法和其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株高产不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸菌株，以及获得该菌株的诱变筛选方法和该菌株的应用。

背景技术

DHA(Docosahexaenoic acid，22：6Δ4.7.10.13.16.19，全名二十二碳六烯酸)是一种重要的长链多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid，简称PUFA)，属于ω-3系列。DHA作为细胞膜合成的必要成分，具有增强视力、促进脑细胞发育等作用，是婴幼儿大脑生长发育和成年人大脑正常功能维持的必要成分，被誉为“脑黄金”。DHA也可以降血脂、预防和治疗动脉硬化、抗炎、抗癌等作用。因而，DHA受到了食品界和医疗界的广泛关注。

传统鱼油来源的DHA，难以满足人们对高品质保健品的要求以及不断增长的市场需求。1968年，Harrington，GW等发现异养培养Crypthecodinium cohnii(早期称：Gyrodinium cohnii)可得到较高产量的DHA，且脂肪酸组成较为单一，总脂含量达20％，其中DHA占30～50％，其他不饱和脂肪酸百分率小于1％，是DHA高效的生产菌之一。1994年，Yano等人自深海鱼肠分离得到5株细菌Vibrio sp.产生DHA，其中有一株6天内能产生0.8mg/L的DHA；1998年，王黎等从鲐鱼和鲭鱼肠道中分离出8株富含多不饱和脂肪酸的革兰氏阴性菌，其中一株WL1021的DHA含量较高；戴传超等筛选出一株产DHA的头孢霉属丝状真菌，菌丝含油脂21.23％，DHA占总脂肪酸的2.51％；Bajpai等发现破囊弧菌Thraustochytrium arueum ATCC34304总脂肪酸中50％均为DHA，在含2.5％淀粉的培养基上培养其DHA产量达到511mg/L；Iida等对培养基进行了优化后细胞产量达到5.7g/L；Lizuyi等则发现Tharustochrtuim arueumATCC28201在培养基中有更分散的形态，在初步优化培养基条件后，ATCC28210最高DHA产量达到850mg/L。Singh等对发酵培养基和条件进行优化后，结果ATCC28210的5d培养生物量和DHA产量达到10.4g/L和1.011g/L；Vazhappilly等研究了20株微藻在三角瓶中光自养生产DHA的潜能，DHA含量最高的是隐甲藻Crypthecodiniumcohnii(19.9％)，然后是Amphidinium carterax(17.0％)和Thraustochytrium aureum(16.1％)。张秋会等为了筛选高产DHA藻株，对8种海洋微藻进行培养，通过气相色谱测定DHA高产株等鞭金藻，其DHA产量为3.2mg/L；赵玉巧等以海水中分离得到产DHA的酒香酵母为出发菌株，对其进行诱变处理，选择吸光值相对较高的菌株，采用有机溶剂萃取法测定油脂含量，其中得到一株菌油脂含量达50.4％。

近年来，科学工作者开展了利用海洋微生物发酵生产DHA的研究。目前国内已公开有三篇涉及微藻发酵生产长链多不饱和脂肪酸DHA方法的专利(公开号分别为CN1101034A、CN1264967C、CN1986822)，其中CN1264967C以裂殖弧菌为研究对象，生物量14～25g/L，DHA占菌体含量18～35％；CN1101034A以隐甲藻为生产菌，生物量只有4～8g/L；前两篇专利产量均较低，无技术优势。CN1986822为2007年刚公开的专利，公开了一种隐甲藻发酵产DHA的培养方法，生物量20～40g/L，海藻细胞含油量20～50％，但较国外发酵水平仍有较大差距，主要原因与所选菌种、发酵工艺有关，难以抵抗国外先进技术带来的竞争压力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供了一株高产二十二碳六烯酸的生产菌株。

本发明还要解决的一个技术问题是提供上述菌株的诱变筛选方法，该方法是一种基于微生物代谢途径分析的全新的理性筛选技术。

本发明最后要解决的技术问题是提供上述生产菌株在制备生产二十二碳六烯酸中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

本发明通过诱变筛选获得一株高产DHA的海洋微藻为HX-308，其分类命名为隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)。

目前该菌株保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)；地址：武汉武汉大学；邮编：430072；登记入册的编号：CCTCC NO：M 208246；保藏日期：2008年12月8日。以此菌作为生产菌株。