[发明专利]一种炔雌醇类似物的分子印迹聚合物的制备方法

说明书

一、技术领域

本发明属于分子印迹聚合物制备技术，特别涉及一种对炔雌醇、雌二醇等甾类激素类药物具有高选择性、高亲和性的富集分离材料的制备方法。

二、背景技术

环境或动物性食品中可能残留的甾类激素对人们的身体健康具有潜在的危害，成为食品安全领域涉及的重要命题。如雌二醇、炔雌醇(17α-ethinylestradiol，EE2)等，它们的活性明显强于天然甾类激素，因此在医学上广泛用于避孕药的合成和疾病的治疗，也在牲畜、水产养殖中作为动物的生长促进剂。这些激素类物质常以药物原形或代谢产物的形式随粪便、尿液等排泄物排出到环境中，绝大多数激素类药物排出到环境中仍具有活性，可直接污染土壤和水源。受污染的水源和土壤可能对农作物及野生植物造成二次污染。目前已有报道环境中甾类激素改变了水生环境中浮游植物的许多性质，例如减少单位环境中种类数目，减少生物量、细胞密度，增加多样性、平均度，以及改变种类结构。

目前，普遍应用的甾类激素检测技术包括了荧光光谱分析，质谱分析，液相色谱，气相色谱，薄层色谱，免疫检测和一些组合分析技术，它们之中除了免疫方法，大多需要昂贵的投资，繁琐的样品预处理程序和大量使用有机溶剂。尽管免疫检测已是非常适用的内源激素分析手段，但在实际应用中也存在专一性和灵敏性的问题，并且还依赖于大量的动物实验，受到条件限制，如实验成本高，不可能全面推广，而且费时、费工，重现性、准确性并不理想。因此开发一种迅速、灵敏和经济的分析检测技术显得十分的迫切。

分子印迹(Molecular Imprinting)是一项近几年来迅速发展的分子识别新技术。它是通过化学分子的自装配(Self-assembling)，合成对特定分子有特异性吸附的高分子化合物。在分子印迹反应中，首先功能单体和模板分子之间通过化学键(包括共价键，离子键，氢键，以及范德华力等等)形成复合物，在随后进行聚合反应中，聚合链的增长和交联将这种复合作用固化，洗脱模板分子，聚合物分子中就形成能特异性吸附模板分子的洞穴，这种聚合物被称为分子印迹聚合物(Molecular Imprinting Polymer，MIP)。这项技术现在已经用于手性色谱与亲和色谱，固相萃取，模拟生物催化等多个领域。

MIP具有特效的选择性和亲和性，可方便地固定在玻璃、陶瓷、光纤上，用作固相萃取剂可简化环境样品体系复杂的预处理程序，为样品的采集、富集和分析提供极大的方便。对毫摩尔水平以下的痕量物质经这一方法预富集处理后，达到色谱检测限以上。大大减少样品预处理的时间，真正做到快速检测。

目前关于雌二醇的分子印迹技术是以聚合物来检测模板分子，由于洗脱时不可能将模板分子全部洗脱，会造成“泄漏”，使得结果呈假阳性。

三、发明内容

技术问题：本发明针对上述技术问题，提供一种炔雌醇类似物的分子印迹聚合物微球的制备方法。该方法制备的MIP对炔雌醇呈现明显的亲和性，且在用于固相萃取材料时不会因为模板的泄漏而影响结果的准确度。

技术方案：一种炔雌醇类似物的分子印迹聚合物的制备方法，制备步骤为：a.以17-乙基雌二醇为模板，将模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂和引发剂混合，超声，在氮气气氛下，于60℃聚合12～24h，得聚合物；所述的功能单体为甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯或丙烯酰胺；所述的交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或双甲基丙烯酸乙二醇酯；所述的致孔剂为乙腈或者甲苯。所述的引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈或过氧化二苯甲酰；所述的模板分子与功能单体，其摩尔比为1∶1～1∶5；所述的模板分子与交联剂，其摩尔比为1∶4～1∶8；所述的致孔剂的体积用量和模板分子摩尔量之比为60mL/mmol；所述的引发剂质量和模板分子摩尔量之比为80mg/mmol；b.将步骤a制备的聚合物离心，弃去上清液，用甲醇-乙酸混合液浸洗去除模板分子，直至紫外检测器检测不到模板分子为止，得到分子印迹聚合物；c.将分子印迹聚合物，真空干燥，得到炔雌醇类似物分子印迹聚合物。

步骤a中，所述的超声及通氮气，其超声时间为5min，通氮气时间为10min。超声是为了分散均匀；通氮气是为了除氧，因为这个引发反应是自由基引发，不能有氧气存在，并且通氮气能增加孔隙率。

步骤b中，所述的离心，其离心速度为15000rpm。保证聚合物能完全沉淀。

步骤c中，在真空干燥之前，聚合物用甲醇清洗，以除去残留的乙酸。

有益效果：