[发明专利]一种食品中致病菌PCR核酸模板快速提取方法

权利要求书

1.一种用于食品中致病菌PCR核酸模板快速提取方法，其特征在于，该方法首先将待检测样本置入快速生长液中，快速培养食品中的致病菌，然后用裸磁粒子吸附致病菌，通过煮沸增菌，经磁分离架分离后用快速洗涤液洗涤后，加入高效裂解液，裂解被吸附的菌液，经煮沸、离心后取上清做PCR检测的核酸模板，具体的步骤是：

1)取待测样本适量，加入适量无菌水，混匀，取其中混匀液20ml，加入100ml的快速生长液中，在37℃条件下，100r/min振荡培养4h，得到培养液；

2)取培养液1ml，加入规格为15ml的无菌离心管中，加无菌生理盐水至10ml，混匀，得到混合溶液；

3)将步骤2)得到的混合溶液中加入100μl的裸磁粒子液，混匀，37℃水浴60min，中间混摇3次，得到混合液；

4)将步骤3)得到的混合液使用磁分离架分离5min，弃上清，加入洗涤液2ml洗3次，每次洗涤时间＞5min，保留沉淀；

5)将步骤4)得到的沉淀中加入裂解液100μl，煮沸20min，离心，取上清做PCR核酸模板；

所述的快速生长液的配方为：蛋白胨25g，氯化镁40g，牛肉膏8g，磷酸氢二钠10g，氯化钠20g，柠檬酸钠5g，磷酸氢钾3.5g，乳糖5g，葡萄糖1.5g，甘露醇2g，柠檬酸钠5g，去氧胆酸钠0.5g，牛肉膏0.8g，蒸馏水定容1000ml，调pH至7.2，于121℃下高压灭菌20min，保存于4℃冰箱中备用；

所述的裸磁粒子液的主要成份为三氯化铁和二氯化铁，以8∶2比例混合溶于适量蒸馏水中，加入适量的NaOH溶液，使三氯化铁和二氯化铁在蒸馏水中反应生成黑棕色产物，用磁力架回收裸磁粒子，用蒸馏水洗涤至中性备用；

所述的高效裂解液为每10ml超纯水中含有3％浓度的三氯乙酸1ml、含量为0.2％的TritonX-100 450μl、2mol/L的KH₂PO₄ 900μl、0.01mol的甘氨酸80μl、10mg溶菌酶，pH为7.5；

所述的快速洗涤液的配方为：NaCl：8.0g，KCl：0.2g，Na₂HPO₄：1.0g，KH₂PO₄：0.24g，用HCl调节pH值至7.8，加蒸馏水定容至1000ml。