[发明专利]增强含脂肪酶酵母细胞透性的方法

权利要求书

1.一种增强含脂肪酶酵母细胞透性的方法，其特征在于采用对酵母细胞细 胞壁和细胞膜有改善作用的有机化合物为细胞透性改善剂，对培养成熟的产脂 肪酶酵母细胞浸泡而成；其方法包括如下步骤：

a、产脂肪酶酵母细胞的菌种活化：在20g/L葡萄糖、10g/L酵母粉、蛋白胨 10g/L和20g/L琼脂的斜面培养基上，于30℃静止培养72h；

b、产脂肪酶酵母细胞的液体种子培养：在100g/L葡萄糖、5.3g/L蛋白胨、 2g/L酵母粉、2g/L尿素和0.5g/L MgSO₄的液体培养基中，于30℃、160r/min摇 床培养24h；

c.产脂肪酶酵母细胞的发酵：在100g/L葡萄糖、1.8g/L蛋白胨，0.5g/L酵 母粉、2g/L KH₂PO₄且pH值自然的液体培养基中，于30℃、160r/min摇床发酵 72h；

d、产脂肪酶酵母细胞的收集：将发酵液过滤得成熟的湿酵母细胞，用生理 盐水洗涤湿细胞3次；

e、有机化合物的选取：选择酮、卤代烃和芳香族化合物中的一种为细胞透 性改善剂；

f、细胞浸泡：根据所选改善剂的特征，配制1.0～15％浓度的有机化合物与 水的混合物，将培养成熟的产脂肪酶酵母细胞浸泡于混合液中，在20～40℃浸 泡15～90min；

g、收集浸泡处理的细胞：过滤收集浸泡的细胞，再用去离子水清洗3次；

h、细胞干燥：于室温下自然风干24～48h。

其中，所述的酮为丙酮、丁酮或异戊酮；所述的卤代烃为二氯甲烷、三氯甲烷 或四氯化碳；所述的芳香族化合物为甲苯、乙苯或丙基苯。

2.根据权利要求1所述一种增强含脂肪酶酵母细胞透性的方法，其特征在 于在步骤e中所述选择有机化合物为甲苯为细胞透性改善剂；在步骤f中的细胞 浸泡条件为：配制5.0％的甲苯与水的混合物，将培养成熟的产脂肪酶酵母细胞 浸泡于混合液中，于20℃浸泡70min。

3.根据权利要求1所述一种增强含脂肪酶酵母细胞透性的方法，其特征在 于在步骤e中所述选择有机化合物为丙酮为细胞透性改善剂；在步骤f中的细胞 浸泡条件为：配制15.0％的丙酮与水的混合物，将培养成熟的产脂肪酶酵母细 胞浸泡于混合液中，于37℃浸泡80min。