[发明专利]用于杂交核酸的方法

权利要求书

1.通过与寡核苷酸-寡聚阳离子缀合物杂交来操作、分离、检测或扩增样品中的靶核酸的方法，其包括让所述核酸与寡核苷酸-寡聚阳离子缀合物反应，所述寡核苷酸-寡聚阳离子缀合物包含至少直接地或通过连接体基团连接在一起的A_i和B_j部分

其中

.A_i是i聚体寡核苷酸，i＝3至50，其中A_i是具有天然或非天然发生的核碱基和/或戊呋喃糖基和/或天然磷酸二酯键的寡聚体，其任选地包含标记物基团

.B_j是j聚体有机寡聚阳离子部分，j＝1至50，其中B是

-HPO₃-R₁-(NH-R₂)_n-NH-R₃-O-，其中R₁、R₂和R₃是相同的或不同的低级亚烃基，当n大于1时，NH-R₂部分是相同的或不同的；

-HPO₃-R₁-CH(X)-R₃-O-，其中R₁和R₃是相同或不同的低级亚烃基，并且X是腐胺、亚精胺或精胺残基。

2.权利要求1的方法，其中A_i选自脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和非天然发生的核碱基例如锁(LNA)核苷酸、PNA以及它们的化学修饰物或取代物例如硫代磷酸酯、2′-氟或2′-O-烷基。

3.权利要求1或2的方法，其中A_i包含选自生色团/荧光团和/或猝灭基团的标记物基团，或选自氨基或巯基修饰剂、间隔子基团、生物素、疏水链、胆固醇衍生物、抗原、蛋白质、肽、磷酸基团或糖的化学部分。

4.权利要求1至3的任一项的方法，其中游离-OH基团存在于A_i的位点3′上。

5.权利要求4的方法，其中所述寡核苷酸-寡聚阳离子缀合物具有

结构Ⅰ

HO-³’A_i⁵’-B_j-R₄

或结构Ⅱ

HO-³’A_i⁵’-R₅-B_j-R₄

或结构Ⅲ

HO-³’A_i1⁵’-B_j-A_i2-R₄

其中

-A_i1和A_i2是相同的或不同的，且如上文中对于A_i所定义；A_i2以3′至5′或5′至3′方向排列；

-R₄是H或连接体、猝灭剂、标记物例如生色团或荧光团、或化学部分例如生物素、疏水链、胆固醇衍生物、抗原、蛋白质、肽、糖或磷酸基团；

-R₅，与H、A_i和B_j不同，是A_i与B_j之间的化学上稳定的或可切割的连接体。

6.权利要求4或5的方法，其中所述分子结合靶核酸并且是DNA或RNA聚合酶的底物。

7.权利要求5或6的方法，其还包括步骤：

-将结构Ⅰ、Ⅱ或Ⅲ的分子例如上文权利要求5中定义的分子与靶核酸分子在允许所述分子与所述靶核酸分子杂交的条件下一起温育，和

-以所述靶核酸分子作为模板延伸所述分子。

8.权利要求5至7的任一项的方法，其通过使用至少一个结构Ⅰ、Ⅱ或Ⅲ的分子允许进行核酸扩增。

9.权利要求4至8的任一项的方法，其中所述分子用于逆转录。

10.权利要求1至3的任一项的方法，其中A_i的位点3′上的-OH基团被封闭。