[发明专利]检测对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性

说明书

发明背景

现有的许多常规系统用于对与患者诊断和治疗相关的微生物学样品进行测试。微生物样品可来自各种来源，包括感染的伤口、生殖器感染、脑脊髓液、血液和脓肿。根据产生预定浓度的细菌或细胞悬浮液的规定程序来从那些微生物样品制备接种物。悬浮液的进一步处理则可取决于应用的检测方法。

这些系统例如用于鉴定患者的样品中存在哪些微生物。典型地在这种系统中，把试剂置于其内存在微生物变色的活性生长培养物的鉴定盘的吸盘或试孔中。基于颜色改变或缺乏颜色改变，就能够通过利用参照表来鉴定微生物。

已经开发了用于微生物的易感性测试的其他系统。这些系统用于确定样品中微生物对各种治疗(如抗生素)的易感性。基于这些测验结果，医生由此能够例如开出将成功杀死或抑制该微生物的抗微生物产品的处方。更具体地，定性易感性测试产生一种微生物对一种特定抗生素是有抗性或是易感性的指示，但是不提供该微生物的易感性或抗性程度的指示。另一方面，定量易感性测试则提供抑制该微生物的生长所需的抗微生物剂的浓度的指示。术语最低抑菌浓度(MIC)用于指代抑制该微生物生长所需的抗微生物剂的最低浓度。

进行这些测试需要自动化系统来最小化技术人员处理时间，同时最小化人为误差的可能性。另外，优选快速并准确获得结果的自动化系统。

其公开通过引用合并在此的美国专利No.6,096,272、美国专利No.6,372,485、和美国专利No.7,115,384描述了这样一种自动化微生物测试系统，该系统测试多个用于鉴定和易感性的多孔测试板，且在测试过程期间人为干预最小。此外，该系统进行比色型与荧光型测试。另外，该系统快速分析积聚的测试数据，以产生准确的鉴定和/或易感性测试结果。

葡萄球菌属和/或链球菌属的某些菌株可表达一种抗生素抗性表型，该表型已知被称为可诱导的大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b(inducible-macrolide-lincosamide-streptogramin b，iMLSb)。这些微生物显示具有erm基因，而且只有当该微生物生长于诱导条件下时才会表达该基因产物。临床和实验室标准研究所(CLSI)推荐使用“D-测试(D-test)”来检测iMLSb表型。“D-测试”是基于生长培养基中存在红霉素将诱导erm基因表达的这一认识。

但是为了使“D-测试”对于检测iMLSb表型有诊断价值，首先必须对微生物进行测试以证实对红霉素的抗性和对克林霉素的易感性。

为了进行“D-测试”，首先必须制备该测试微生物的标准化悬浮液。然后把该微生物的薄菌苔置于琼脂平板上。把灌注有特定量红霉素的滤盘置于菌苔上。把灌注有特定量克林霉素的第二滤盘以与红霉素盘相隔固定的距离置于相同的菌苔上。随后该琼脂平板孵育过夜。孵育期间，滤盘中的抗生素将弥散到琼脂培养基中，形成跨越整个琼脂平板的抗生素梯度。由于红霉素盘与克林霉素盘彼此接近，在两个盘之间的琼脂中形成两种抗生素的复合梯度。如果测试微生物具有可诱导的erm基因，它将变得对两个盘之间区域内的克林霉素具有更强的抗性，从而形成“D”形生长抑制区。D-测试是一种用于检测iMLSb表型的高度有效的方法，但是需要对测试微生物和抗生素试剂进行大量操作，以及对测试结果的主观解释。

需要一种用户友好的测试用以在自动化抗菌素易感性测试(AST)系统中检测微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)，而无需处理抗生素盘。

发明概述

在一个实施方案中，提供了一种用于诸如自动化微生物鉴定(ID)与抗微生物易感性测定(AST)系统之类的测试系统的测试板，该测试板具有多个孔、林可酰胺剂、以及大环内酯剂，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者。合适的林可酰胺剂的一个例子是克林霉素，合适的大环内酯剂的一个例子是红霉素。

在另一个实施方案中，提供了一种用于诸如自动化微生物鉴定(ID)与抗微生物易感性测定(AST)系统之类的测试系统的测试板，该测试板具有多个孔、林可酰胺剂、以及大环内酯剂，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，一个或多个孔含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂，并且一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者。

在又一个实施方案中，提供了一种用于诸如自动化微生物鉴定(ID)与抗微生物易感性测定(AST)系统之类的测试系统的测试板，该测试板具有多个孔、至少一种林可酰胺剂、以及至少一种大环内酯剂，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，一个或多个孔含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂，并且一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者。