[发明专利]增强对有鞭毛的细菌的免疫反应的组合物和方法

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求于2007年10月30日提交的美国临时专利申请系列号60/983,803的优先权，该临时专利的全部内容在此通过引用并入本文。

关于联邦资助研究的声明

本发明部分是在美国政府授予的USDA/NRI计划#2007-01953的资助下完成。美国政府可对本发明享有某些权利。

引言

沙门氏菌(Salmonella)仍旧是全世界的人类食物传播感染的最常被报道的细菌性诱因之一，并且流行病学证据表明家禽和家禽产品是人类感染的重要来源。在美国，每年报道估计一百四十万例的人类沙门氏菌感染。这些案例中，血清型肠炎沙门氏菌(SE)和鼠伤寒沙门氏菌(ST)是最常被分离的，虽然一些其它的血清型也被显示引起人类中的肠炎。

沙门氏菌不常导致家禽群体中的明显的临床疾病。但是，在具有一些沙门氏菌分离体(isolate)的幼鸡中的感染导致孵化后头48小时内的2％发病率，和头5天内的达到20％发病率。因此，增强家禽种群对沙门氏菌的抵抗力不仅将降低低水平疾病对性能的影响，而且也还将降低对人类种群的重要的健康风险。

发明内容

本发明公开了包含编码第一多肽的fliC多核苷酸序列和编码CD154多肽的第二多核苷酸序列的疫苗。CD154多肽能够与CD40结合，其具有50个以下的氨基酸，并包括SEQ ID NO：8的140-149位氨基酸或其同源物。

在另一方面，本发明公开了包含肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)13A的变异体的疫苗。沙门氏菌包含编码fliC多肽的第一多核苷酸序列。

在另一方面，本发明提供通过施用细菌来增强受试者对有鞭毛的细菌的免疫反应的方法。细菌包括编码fliC多肽的第一多核苷酸序列和编码CD154多肽的第二多核苷酸序列。CD154多肽能够与CD40结合，其具有50个以下的氨基酸，并包括SEQ ID NO：8的140-149位氨基酸或其同源物。细菌以增强受试者对有鞭毛的细菌的免疫反应的有效量进行施用。

在另一方面，本发明提供通过施用肠炎沙门氏菌13A的变异体增强受试者对有鞭毛的细菌的免疫反应的方法。沙门氏菌包括编码fliC多肽的第一多核苷酸序列。沙门氏菌以增强受试者对有鞭毛的细菌的免疫反应的有效量进行施用。

在另一方面，本发明提供通过施用细菌降低受试者中与有鞭毛的细菌感染相关的发病率的方法。细菌包括编码fliC多肽的第一多核苷酸序列和编码CD154多肽的第二多核苷酸序列。CD154多肽能够与CD40结合，其具有50个以下的氨基酸，并包括SEQ ID NO：8的140-149位氨基酸或其同源物。细菌以降低受试者的感染有鞭毛的细菌后的发病率的有效量进行施用。

在另一方面，本发明提供通过施用肠炎沙门氏菌13A的变异体降低受试者中有鞭毛的细菌感染的发病率的方法。沙门氏菌包括编码fliC多肽的第一多核苷酸序列。沙门氏菌以降低受试者的感染有鞭毛的细菌后的发病率的有效量进行施用。

附图说明

图1描述在肠炎沙门氏菌中进行定点突变的方案。

图2描述重叠延伸PCR方法的设计方案，其用于产生插入至lamB多核苷酸的环区9中的fliC和fliC-CD154插入物。

图3为柱形图，显示使用标明的细菌接种后3天，与最初肝/脾和盲肠扁桃体中的接种物相比较，肠炎沙门氏菌的回收百分率。

图4为柱形图，显示使用标明的细菌接种后21天，与最初肝/脾和盲肠扁桃体中的接种物相比较，肠炎沙门氏菌的回收百分率。

具体实施方式

针对沙门氏菌的疫苗接种是困难的，因为已经描述了2000种以上的血清型并且针对一种血清型的免疫一般不能赋予对不同血清型的免疫力。需要开发针对沙门氏菌的疫苗以保护人类、家禽和其它家养动物。能够保护针对多种血清型的疫苗是最佳的。本发明提供包含fliC的高度保守区的疫苗，fliC为有鞭毛的沙门氏菌上发现的鞭毛丝蛋白。

重组DNA技术能使对许多细菌及病毒物种的操作相对容易。一些细菌及病毒有轻微的致病性或无致病性，却能够产生强烈的免疫反应。这些细菌及病毒是激发对抗原的免疫反应的理想疫苗载体。细菌或病毒疫苗载体能够模拟自然感染并产生强烈的和持久的免疫性。生产和施用疫苗载体通常相对廉价。此外，这样的载体经常能携带不止一个抗原，而且可以提供针对多种感染性试剂的保护。