[发明专利]赋予针对诺如病毒的保护性免疫应答的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2007年9月18日提交的美国临时申请No.60/973,389和2007年11月9日提交的美国临时申请No.60/986,826的优先权，通过述及将它们完整收入本文。

发明领域

本申请属于疫苗，特别是针对诺如病毒(norovirus)的疫苗的领域。另外，本发明涉及制备疫苗组合物的方法和诱导保护性免疫应答的方法。

关于政府支持的声明

本发明是在来自美国陆军医学研究和物资司令部的政府支持下产生的，合同号W81XWH-05-C-0135。政府对本发明可具有某些权利。

发明背景

诺如病毒是不可培养的人类杯状病毒，已经成为非细菌性胃肠炎的流行性爆发的单一最重要起因(Glass et al.，2000；Hardy et al.，1999)。在灵敏的分子诊断测定法的开发之前，对诺如病毒的临床意义的重视不够。原型基因小组I(genogroup I)诺沃克病毒(NV)基因组的克隆和自重组杆状病毒表达系统生成病毒样颗粒(VLP)引起了测定法的开发，其揭示了分布广泛的诺如病毒感染(Jiang et al.1990；1992)。

诺如病毒是单链、正义RNA病毒，含有不分段的RNA基因组。病毒基因组编码三个可读框，其中后两个分别规定主要衣壳蛋白和次要结构蛋白的生成(Glass et al.2000)。当在真核表达系统中以高水平表达时，NV和某些其它诺如病毒的衣壳蛋白自组装成在结构上模拟天然诺如病毒病毒粒(virion)的VLP。当通过透射电子显微术观看时，VLP在形态上与自人粪样品分离的感染性病毒粒不可区分。

针对诺如病毒的免疫应答是复杂的，而且现在正在阐明保护的关联(correlate)。用天然病毒实施的人志愿者研究证明了粘膜衍生的记忆免疫应答提供免于感染的短期保护并提示疫苗介导的保护是可行的(Lindesmith et al.2003；Parrino et al.1997；Wyatt et al.，1974)。

虽然由于VLP的可得性和它们以大量生成的能力，诺如病毒不能在体外培养，但是在限定诺如病毒衣壳的抗原拓扑学和结构拓扑学方面已经取得了可观的进步。VLP保留病毒衣壳蛋白的真实构象(authentic confirmation)，但是缺乏感染性遗传物质。结果，VLP模拟病毒与细胞受体的功能相互作用，由此引发适宜的宿主免疫应答，但是缺乏繁殖或引起感染的能力。与NIH联合，Baylor College of Medicine在学术性的、调查人发起的I期临床试验中研究了人志愿者中针对NV VLP的体液、粘膜和细胞免疫应答。口服施用VLP在健康成人中是安全的且有免疫原性的(Ball et al.1999；Tacket et al.2003)。在其它学术中心，在动物模型中进行的临床前实验已经证明了当与细菌外毒素佐剂一起鼻内施用时针对VLP的免疫应答的增强(Guerrero et al.2001；Nicollier-Jamot et al.2004；Periwal et al.2003；Souza et al.(2007)Vaccine，doi:10.1016/j.vaccine.2007.09.040)。然而，没有研究报告使用任何诺如病毒疫苗能够实现针对诺如病毒的保护性免疫。

发明概述

本发明提供了在受试者(特别是人类受试者)中诱导针对诺如病毒感染的保护性免疫的方法，包括施用包含至少一种诺如病毒抗原的疫苗。在一个实施方案中，所述抗原是诺如病毒病毒样颗粒(VLP)。本发明的方法中所使用的疫苗可进一步包含一种或多种佐剂。所述诺如病毒VLP可以选自基因小组I或基因小组II病毒或其混合物。在一个实施方案中，所述疫苗以约0.01％至约80％(以重量计)的浓度包含诺如病毒VLP。在另一个实施方案中，所述疫苗包含约1μg至约100mg每剂的诺如病毒VLP剂量。

在一些实施方案中，所述疫苗进一步包含投递剂，其功能为增强抗原摄取、提供贮存效应、延长抗原在投递部位的保留时间、或经由投递部位的细胞紧密连接的松弛来增强免疫应答。所述投递剂可以是生物粘着剂，优选选自下组的粘膜粘着剂：硫酸皮肤素、软骨素、果胶、粘蛋白、藻酸盐、聚丙烯酸的交联衍生物、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、羟丙基甲基纤维素、凝集素、菌毛/伞毛蛋白质、和羧甲基纤维素。优选的是，所述粘膜粘着剂是多糖。最优选的是，所述粘膜粘着剂是壳聚糖或含有壳聚糖的混合物，诸如壳聚糖盐或壳聚糖碱。