[发明专利]螺旋藻多糖滴眼液及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种预防和治疗眼新生血管疾病的滴眼液，特别涉及到一种螺旋藻多糖滴眼液及其制备方法和应用。

背景技术

眼新生血管疾病现已成为我国致盲性眼病的首要原因，但尚未对其发病机制完全弄清，临床上也缺少有效的治疗方法。临床常用的治疗新生血管方法是激光光凝和光凝联合光动力学的方法，但其长期疗效不佳且费用高，更重要的是新生血管一旦形成，对眼部造成的损害和破坏不可逆转，使大多数患者最终失明。寻找安全有效的具有抗新生血管活性的生物活性物质对于预防和治疗眼新生血管相关疾病是非常必要的，近年来开始受到各国学者的重视，但是尚没有相关的报导。

螺旋藻是最古老的多细胞原始海藻。据报导螺旋藻具有显著的降血糖、降血压、降血脂等功效。螺旋藻化学成分中仅占2-3％的螺旋藻多糖，具有广泛而复杂的生物活性，在抗肿瘤及抗辐射上存在有药用疗效，是一种安全有效的生物活性物质。但目前螺旋藻仅用于保健品及食品当中，因此开发螺旋藻及其生物活性物质专门用于眼用新生血管治疗及预防是非常必要和重要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种螺旋藻多糖滴眼液的制备和应用，以弥补现有眼用新生血管治疗及预防药物的缺乏和不足。

研究发现并证实，螺旋藻多糖能够抑制血管内皮细胞增殖、迁移等血管生成过程；并在此基础上，制备成了一种滴眼液，发现其能有效抑制小鼠碱烧伤后角膜新生血管的生长，减少角膜炎症细胞的浸润，改善角膜水肿，显著降低角膜炎症因子及新生血管生成相关因子的表达，而且能够有效地防治碱烧伤引起的新生血管生成及角膜其他病变。因此，本滴眼液在防治角膜碱烧伤造成的角膜新生血管中有显著的疗效，能够有效地抑制眼新生血管的发生发展过程。

本发明以螺旋藻藻粉为原材料，提取制备了螺旋藻多糖，用人工泪液稀释成一种以生物活性物质为主要成分的眼用滴眼液，用于抑制眼部新生血管的生成。

本发明的螺旋藻多糖滴眼液，包括螺旋藻多糖和人工泪液，其中的螺旋藻多糖浓度为10～500μg/ml，优选浓度为100μg/ml。

本发明的制备方法：一、首先从螺旋藻藻粉中提取螺旋藻多糖，即是以钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)藻粉为原材料，提取制备而得。二、然后制备螺旋藻多糖滴眼液。

本发明的螺旋藻多糖滴眼液应用于眼部新生血管性疾病。

本发明首次将螺旋藻多糖制成滴眼液应用到防治眼部新生血管性疾病。本发明的滴眼液制备方法简单，便于实施，对于眼新生血管的防治效果显著，具有广阔的应用开发前景。

具体实施方式

本发明以钝顶螺旋藻藻粉(山东富施特生物技术有限公司生产)为原材料，提取制备了螺旋藻多糖，用人工泪液稀释成一种以生物活性物质为主要成分的眼用滴眼液，用于抑制眼部新生血管的生成。其中的螺旋藻多糖浓度为10～500μg/ml，优选100μg/ml。本发明的详细制备方法：

步骤一、螺旋藻多糖的制备：以如下工艺制备本发明所需的螺旋藻多糖。

(1)取钝顶螺旋藻干粉加95％乙醇，浸泡过夜；(2)离心37℃烘干，按1：12比例加双蒸水；(3)用NaOH调pH至10.0，80℃水浴4～6h；(4)离心，调pH至7.0；(5)加质量体积比为5％三氯乙酸沉淀，4℃过夜；(6)离心，取上清液，再加质量体积比为5％三氯乙酸沉淀3h；(7)离心，取上清液，加5倍体积乙醇沉淀，4℃过夜；(8)以纯丙酮清洗沉淀2次，真空冷冻干燥；(9)将上述沉淀物置于-20℃保存3日以上，以确保丙酮完全挥发；(10)加入生理盐水充分溶解沉淀，离心，去除未能溶解的物质；(11)使用0.22μm滤膜过滤除菌，得到了无菌的螺旋藻多糖溶液。

步骤二、将上述的螺旋藻多糖溶液使用人工泪液稀释到螺旋藻多糖含量10～500μg/ml，即得到本发明的螺旋藻多糖滴眼液。

上述人工泪液可以用替若复方氯化钠滴眼液来替代。

以下列多个实施例，详细说明本发明如下。

实施例1

首先建立C57 BL/6小鼠碱烧伤动物模型：模型动物选用C57 BL/66—8周龄，雌性小鼠，小鼠全身麻醉，盐酸丙美卡因滴眼液点眼，3μl 1N NaOH直接滴到小鼠角膜表面，进行碱烧伤30秒，随后立即用大于20ml生理盐水冲洗。

对上述建立的小鼠碱烧伤动物模型，分为对照组和治疗组两组烧伤后即进行点眼治疗，每眼每次点滴眼液5μl，每天点眼4次，点眼治疗7天。具体分组如下：

对照组：采用替若复方氯化钠滴眼液点眼治疗。

治疗组：采用螺旋藻多糖滴眼液点眼治疗。